การหาปริมาณโปรตีนในปัสสาวะในเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณ การหาโปรตีนในปัสสาวะโดยวิธี Brandberg - Roberts - Stolnikov

เป็นหนึ่งในสัญญาณที่สำคัญและต่อเนื่องที่สุดของโรคไตและทางเดินปัสสาวะ การกำหนดความเข้มข้นของโปรตีนในปัสสาวะเป็นองค์ประกอบที่สำคัญและจำเป็นในการวิเคราะห์ปัสสาวะ การระบุและการประเมินเชิงปริมาณของโปรตีนในปัสสาวะมีความสำคัญไม่เพียงแต่ในการวินิจฉัยโรคไตปฐมภูมิและทุติยภูมิจำนวนมากเท่านั้น การประเมินการเปลี่ยนแปลงความรุนแรงของโปรตีนในปัสสาวะในไดนามิกจะนำข้อมูลเกี่ยวกับกระบวนการทางพยาธิวิทยาเกี่ยวกับประสิทธิผลของการรักษา การตรวจหาโปรตีนในปัสสาวะ แม้ในปริมาณเพียงเล็กน้อย ควรเตือนถึงโรคไตหรือทางเดินปัสสาวะที่อาจเกิดขึ้นได้ และควรตรวจซ้ำ ควรสังเกตเป็นพิเศษว่าการศึกษาปัสสาวะไม่สมเหตุสมผล และโดยเฉพาะอย่างยิ่ง การตรวจหาโปรตีนในปัสสาวะโดยไม่ปฏิบัติตามกฎเกณฑ์ทั้งหมดในการเก็บรวบรวม

วิธีการทั้งหมดในการหาโปรตีนในปัสสาวะสามารถแบ่งออกเป็น:

คุณภาพ,
กึ่งเชิงปริมาณ
เชิงปริมาณ

วิธีการเชิงคุณภาพ

ทุกอย่าง การทดสอบโปรตีนในปัสสาวะคุณภาพสูงขึ้นอยู่กับความสามารถของโปรตีนในการทำให้เสียสภาพภายใต้อิทธิพลของปัจจัยทางกายภาพและทางเคมีต่างๆ เมื่อมีโปรตีนในตัวอย่างปัสสาวะทดสอบ อาจมีตะกอนขุ่นหรือตะกอนตกตะกอนปรากฏขึ้น

เงื่อนไขสำหรับการกำหนดโปรตีนในปัสสาวะตามปฏิกิริยาการแข็งตัวของเลือด:

ปัสสาวะต้องเป็นกรด ปัสสาวะของปฏิกิริยาอัลคาไลน์ถูกทำให้เป็นกรดด้วยกรดอะซิติกหลายหยด (2 - 3) หยด (5 - 10%)
ปัสสาวะควรมีความใส หมอกควันจะถูกลบออกผ่านตัวกรองกระดาษ หากความขุ่นไม่หายไป ให้เติมแป้งโรยตัวหรือแมกนีเซียที่ไหม้ (ประมาณ 1 ช้อนชาต่อปัสสาวะ 100 มล.) เขย่าและกรอง
ควรทำการทดสอบคุณภาพในหลอดทดลองสองหลอด ซึ่งหนึ่งในนั้นคือหลอดควบคุม
ควรมองหาหมอกควันบนพื้นหลังสีดำในแสงที่ส่องผ่าน

วิธีการเชิงคุณภาพในการหาโปรตีนในปัสสาวะ ได้แก่

การทดสอบการเดือดและอื่น ๆ

การศึกษาจำนวนมากแสดงให้เห็นว่าไม่มีวิธีการใดที่เป็นที่รู้จักสำหรับการกำหนดคุณภาพของโปรตีนในปัสสาวะที่ให้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้และทำซ้ำได้ อย่างไรก็ตามสิ่งนี้ใน CDL ส่วนใหญ่ในรัสเซีย วิธีการเหล่านี้ใช้กันอย่างแพร่หลายในการตรวจคัดกรอง - ในปัสสาวะที่มีปฏิกิริยาเชิงคุณภาพในเชิงบวก การกำหนดปริมาณของโปรตีนจะดำเนินการต่อไป จากปฏิกิริยาเชิงคุณภาพ การทดสอบ Geller และการทดสอบกรดซัลโฟซาลิไซลิกมักใช้บ่อยกว่า อย่างไรก็ตาม การทดสอบกรดซัลโฟซาลิไซลิกโดยทั่วไปถือว่าเหมาะสมที่สุดสำหรับการตรวจหาโปรตีนในปัสสาวะทางพยาธิวิทยา การทดสอบการเดือดนั้นแทบจะไม่ได้ใช้ในปัจจุบันเนื่องจากความลำบากและระยะเวลา

วิธีกึ่งเชิงปริมาณ

ถึง วิธีกึ่งเชิงปริมาณเกี่ยวข้อง:

การตรวจหาโปรตีนในปัสสาวะโดยใช้แผ่นตรวจวินิจฉัย

วิธี Brandberg-Roberts-Stolnikov ขึ้นอยู่กับการทดสอบ Geller ring ดังนั้นด้วยวิธีนี้จะพบข้อผิดพลาดเดียวกันเช่นเดียวกับการทดสอบ Geller

ทุกวันนี้มีการใช้แถบตรวจวินิจฉัยเพื่อตรวจหาโปรตีนในปัสสาวะมากขึ้น สำหรับการกำหนดกึ่งปริมาณของโปรตีนในปัสสาวะบนแถบ มักใช้สีย้อมสีน้ำเงินโบรโมฟีนอลในบัฟเฟอร์ซิเตรตเป็นตัวบ่งชี้ ปริมาณโปรตีนในปัสสาวะพิจารณาจากความเข้มของสีเขียวแกมน้ำเงินที่พัฒนาขึ้นหลังจากสัมผัสกับโซนปฏิกิริยากับปัสสาวะ ประเมินผลด้วยสายตาหรือใช้เครื่องวิเคราะห์ปัสสาวะ แม้จะมีความนิยมอย่างมากและข้อดีที่เห็นได้ชัดของวิธีเคมีแบบแห้ง (ความเรียบง่าย ความเร็วของการวิเคราะห์) วิธีการวิเคราะห์ปัสสาวะโดยทั่วไปเหล่านี้และการกำหนดโปรตีนโดยเฉพาะอย่างยิ่งไม่ได้ไม่มีข้อเสียอย่างร้ายแรง หนึ่งในนั้นที่นำไปสู่การบิดเบือนข้อมูลการวินิจฉัยคือความไวที่มากขึ้นของตัวบ่งชี้โบรโมฟีนอลสีน้ำเงินต่ออัลบูมินเมื่อเปรียบเทียบกับโปรตีนอื่น ๆ ในเรื่องนี้ แผ่นทดสอบส่วนใหญ่ได้รับการปรับให้เข้ากับการตรวจหาโปรตีนในไตที่คัดเลือกโดยเฉพาะ เมื่อโปรตีนในปัสสาวะเกือบทั้งหมดเป็นอัลบูมิน ด้วยความก้าวหน้าของการเปลี่ยนแปลงและการเปลี่ยนแปลงของโปรตีนในไตที่คัดเลือกไปเป็นแบบไม่คัดเลือก (การปรากฏตัวของโกลบูลินในปัสสาวะ) ผลลัพธ์ของการกำหนดโปรตีนจะถูกประเมินต่ำไปเมื่อเปรียบเทียบกับค่าจริง ข้อเท็จจริงนี้ไม่ได้ทำให้สามารถใช้วิธีนี้ในการหาโปรตีนในปัสสาวะเพื่อประเมินสถานะของไต (glomerular filter) ในการเปลี่ยนแปลงได้ ในกรณีของโปรตีนในท่อปัสสาวะ ผลของการกำหนดโปรตีนจะถูกประเมินต่ำเกินไป การวัดปริมาณโปรตีนด้วยแผ่นทดสอบไม่ใช่ตัวบ่งชี้ที่เชื่อถือได้สำหรับระดับโปรตีนในปัสสาวะต่ำ (แถบทดสอบที่ผลิตในปัจจุบันส่วนใหญ่ไม่มีความสามารถในการจับโปรตีนในปัสสาวะที่ความเข้มข้นต่ำกว่า 0.15 กรัม/ลิตร) ผลลัพธ์เชิงลบของการกำหนดโปรตีนบนแถบนี้ไม่รวมการมีอยู่ของโกลบูลิน, เฮโมโกลบิน, uromucoid, โปรตีน Bens-Jones และ paraproteins อื่น ๆ ในปัสสาวะ

เกล็ดของเมือกที่มีไกลโคโปรตีนในปริมาณสูง (เช่น ในกระบวนการอักเสบในทางเดินปัสสาวะ pyuria แบคทีเรีย) สามารถเกาะติดกับโซนตัวบ่งชี้ของแถบและนำไปสู่ผลลัพธ์ที่เป็นเท็จ ผลบวกเท็จยังสามารถเชื่อมโยงกับความเข้มข้นสูงของยูเรีย ปัญหาแสงและการมองเห็นสีไม่ดีอาจทำให้เกิดผลลัพธ์ที่ไม่ถูกต้อง

ในเรื่องนี้ การใช้แผ่นตรวจวินิจฉัยควรจำกัดเฉพาะขั้นตอนการตรวจคัดกรอง และผลที่ได้รับด้วยความช่วยเหลือควรได้รับการพิจารณาว่าเป็นเครื่องบ่งชี้เท่านั้น

วิธีการเชิงปริมาณ

ถูกต้อง การหาปริมาณโปรตีนในปัสสาวะในบางกรณีก็กลายเป็นงานที่น่ากลัว ความยากลำบากในการแก้ปัญหานั้นพิจารณาจากปัจจัยหลายประการดังต่อไปนี้:

ปริมาณโปรตีนต่ำในปัสสาวะของคนที่มีสุขภาพดีซึ่งมักจะอยู่ที่เกณฑ์ความไวของวิธีการที่รู้จักมากที่สุด
การปรากฏตัวของสารประกอบหลายชนิดในปัสสาวะที่อาจรบกวนปฏิกิริยาเคมี
ความผันผวนอย่างมีนัยสำคัญในเนื้อหาและองค์ประกอบของโปรตีนในปัสสาวะในโรคต่าง ๆ ซึ่งทำให้การเลือกวัสดุสอบเทียบที่เพียงพอมีความซับซ้อน

ในห้องปฏิบัติการทางคลินิกมักใช้วิธีการที่เรียกว่า "กิจวัตร" ในการกำหนดโปรตีนในปัสสาวะเป็นหลัก แต่ก็ไม่อนุญาตให้ได้ผลลัพธ์ที่น่าพอใจเสมอไป

จากมุมมองของนักวิเคราะห์มืออาชีพที่ทำงานในห้องปฏิบัติการ วิธีการที่ออกแบบมาเพื่อวัดปริมาณโปรตีนในปัสสาวะต้องเป็นไปตามข้อกำหนดต่อไปนี้:

มีความสัมพันธ์เชิงเส้นตรงระหว่างการดูดซึมของสารเชิงซ้อนที่เกิดขึ้นระหว่างปฏิกิริยาเคมีกับปริมาณโปรตีนในตัวอย่างในระดับความเข้มข้นที่หลากหลาย ซึ่งจะหลีกเลี่ยงการดำเนินการเพิ่มเติมเมื่อเตรียมตัวอย่างสำหรับการวิจัย
ควรจะง่าย ไม่ต้องการคุณสมบัติของนักแสดงสูง ดำเนินการจำนวนน้อย;
มีความไวสูง ความน่าเชื่อถือในการวิเคราะห์เมื่อใช้วัสดุที่ตรวจสอบในปริมาณน้อย
ทนต่อปัจจัยต่าง ๆ (ความผันผวนในองค์ประกอบของตัวอย่าง การปรากฏตัวของยา ฯลฯ );
มีค่าใช้จ่ายที่ยอมรับได้
สามารถปรับให้เข้ากับเครื่องวิเคราะห์อัตโนมัติได้อย่างง่ายดาย
ผลการตรวจไม่ควรขึ้นอยู่กับองค์ประกอบโปรตีนของตัวอย่างปัสสาวะที่วิเคราะห์

ไม่มีวิธีการใดที่เป็นที่รู้จักในปัจจุบันสำหรับการกำหนดปริมาณโปรตีนในปัสสาวะที่สามารถเรียกร้องได้อย่างเต็มที่ว่าเป็น "มาตรฐานทองคำ"

วิธีการเชิงปริมาณสำหรับการกำหนดโปรตีนในปัสสาวะสามารถแบ่งออกเป็นความขุ่นและสี

วิธีการวัดความขุ่น

วิธีการวัดความขุ่นรวมถึง:

การหาโปรตีนด้วยกรดซัลโฟซาลิไซลิก (SSA)
การหาโปรตีนด้วยกรดไตรคลอโรอะซิติก (TCA)
การหาปริมาณโปรตีนด้วยเบนโซเนียมคลอไรด์

วิธีการวัดความขุ่นขึ้นอยู่กับความสามารถในการละลายของโปรตีนในปัสสาวะที่ลดลงเนื่องจากการก่อตัวของสารแขวนลอยของอนุภาคแขวนลอยภายใต้อิทธิพลของสารตกตะกอน ปริมาณโปรตีนในตัวอย่างทดสอบจะพิจารณาจากความเข้มของการกระเจิงของแสง ซึ่งพิจารณาจากจำนวนของอนุภาคที่กระเจิงแสง (วิธีการวิเคราะห์เนเฟโลเมตริก) หรือโดยการลดทอนของฟลักซ์แสงโดยสารแขวนลอยที่ได้ (วิธีการวิเคราะห์ความขุ่น)

ปริมาณการกระเจิงของแสงในวิธีการตกตะกอนเพื่อตรวจหาโปรตีนในปัสสาวะขึ้นอยู่กับปัจจัยหลายประการ: อัตราการผสมตัวทำปฏิกิริยา อุณหภูมิของส่วนผสมของปฏิกิริยา ค่า pH ของตัวกลาง การมีอยู่ของสารประกอบแปลกปลอม และวิธีการตรวจวัดแสง การยึดมั่นในสภาวะของปฏิกิริยาอย่างระมัดระวังส่งผลให้เกิดการแขวนลอยที่เสถียรด้วยขนาดอนุภาคคงที่และผลลัพธ์ที่ทำซ้ำได้ค่อนข้างมาก

ยาบางชนิดรบกวนผลของวิธีการวัดความขุ่นในการกำหนดโปรตีนในปัสสาวะ ส่งผลให้เกิดผลลัพธ์ที่เรียกว่า "ผลบวกเท็จ" หรือ "ผลลบเท็จ" ซึ่งรวมถึงยาปฏิชีวนะบางชนิด (เบนซิลเพนิซิลลิน คลอกซาซิลลิน ฯลฯ ) สารที่มีไอโอดีนกัมมันตภาพรังสี ยาซัลฟา

วิธีการวัดความขุ่นนั้นยากต่อการกำหนดมาตรฐาน ซึ่งมักจะนำไปสู่ผลลัพธ์ที่ผิดพลาด แต่ถึงกระนั้น ก็ยังมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการ เนื่องจากต้นทุนต่ำและความพร้อมใช้งานของรีเอเจนต์ วิธีการที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในรัสเซียสำหรับการกำหนดโปรตีนด้วยกรดซัลโฟซาลิไซลิก

วิธีการสี

วิธีที่มีความละเอียดอ่อนและแม่นยำที่สุดคือวิธีการวัดสีเพื่อกำหนดปริมาณโปรตีนในปัสสาวะทั้งหมดโดยพิจารณาจากปฏิกิริยาสีจำเพาะของโปรตีน

ซึ่งรวมถึง:

ปฏิกิริยาไบยูเรต,
วิธีโลว์รี่
วิธีการขึ้นอยู่กับความสามารถของสีย้อมต่างๆในการสร้างสารเชิงซ้อนที่มีโปรตีน:
- พอนโซ เอส (ปอนโซ เอส),
- คูแมสซี่ บริลเลียนท์ บลู
- ไพโรกัลลอลสีแดง

จากมุมมองของนักแสดง ในการทำงานประจำวันของห้องปฏิบัติการที่มีการศึกษาจำนวนมาก วิธีไบยูเรตนั้นไม่สะดวกเนื่องจากมีการดำเนินการจำนวนมาก ในเวลาเดียวกัน วิธีการนี้มีลักษณะเฉพาะที่มีความน่าเชื่อถือในการวิเคราะห์สูง ช่วยในการกำหนดโปรตีนในช่วงความเข้มข้นที่หลากหลาย และตรวจหาอัลบูมิน โกลบูลิน และพาราโปรตีนที่มีความไวที่ใกล้เคียงกัน ซึ่งเป็นผลมาจากวิธีไบยูเร็ตถือเป็นข้อมูลอ้างอิง และแนะนำให้เปรียบเทียบกับวิธีวิเคราะห์อื่นๆ เพื่อตรวจหาโปรตีนในปัสสาวะ ควรใช้วิธีการไบยูเรตในการตรวจวัดโปรตีนในปัสสาวะในห้องปฏิบัติการที่ให้บริการแผนกโรคไต และใช้ในกรณีที่มีข้อสงสัยในผลการตรวจวัดโดยใช้วิธีอื่น ตลอดจนกำหนดปริมาณการสูญเสียโปรตีนรายวันในผู้ป่วยโรคไต .

วิธี Lowry ซึ่งมีความไวสูงกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับวิธีไบยูเรต เป็นการผสมผสานระหว่างปฏิกิริยาไบยูเรตและปฏิกิริยาโฟลินกับกรดอะมิโนไทโรซีนและทริปโตเฟนในโมเลกุลโปรตีน แม้จะมีความไวสูง แต่วิธีนี้ไม่ได้ให้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้เสมอไปเมื่อพิจารณาปริมาณโปรตีนในปัสสาวะ เหตุผลนี้คือปฏิกิริยาที่ไม่เฉพาะเจาะจงของรีเอเจนต์ของ Folin กับส่วนประกอบที่ไม่ใช่โปรตีนของปัสสาวะ (ส่วนใหญ่มักเป็นกรดอะมิโน กรดยูริก คาร์โบไฮเดรต) การแยกสารเหล่านี้และส่วนประกอบอื่นๆ ของปัสสาวะด้วยการฟอกไตหรือการตกตะกอนของโปรตีนทำให้สามารถใช้วิธีนี้ในการวัดปริมาณโปรตีนในปัสสาวะได้สำเร็จ ยาบางชนิด เช่น salicylates, chlorpromazine, tetracyclines สามารถมีอิทธิพลต่อวิธีนี้และบิดเบือนผลการวิจัย

ความไวที่เพียงพอ ความสามารถในการทำซ้ำได้ดี และความง่ายในการกำหนดโปรตีนโดยการผูกมัดของสีย้อมทำให้วิธีการเหล่านี้มีแนวโน้มดี อย่างไรก็ตาม ค่ารีเอเจนต์ที่มีราคาสูงทำให้ไม่สามารถนำไปใช้ในห้องปฏิบัติการในวงกว้างได้ ปัจจุบันวิธีการที่ใช้ไพโรกัลลอลเรดกำลังแพร่หลายมากขึ้นในรัสเซีย

เมื่อทำการศึกษาระดับโปรตีนในปัสสาวะ ต้องคำนึงว่าวิธีการต่างๆ ในการตรวจหาโปรตีนในปัสสาวะมีความไวและความจำเพาะที่แตกต่างกันของโปรตีนในปัสสาวะจำนวนมาก

โปรตีนในปัสสาวะ = 0.4799 B + 0.5230 L;
โปรตีนในปัสสาวะ = 1.5484 B - 0.4825 S;
โปรตีนในปัสสาวะ = 0.2167 S + 0.7579 L;
โปรตีนในปัสสาวะ = 1.0748 P - 0.0986 B;
โปรตีนในปัสสาวะ = 1.0104 P - 0.0289 S;
โปรตีนในปัสสาวะ = 0.8959 P + 0.0845 L;

ที่ไหน:
NS- ผลการวัดด้วย Coomassie G-250;
หลี่- ผลการวัดด้วยรีเอเจนต์ของโลว์รี
NS- ผลการวัดด้วย pyrogallol molybdate;
NS- ผลการวัดด้วยกรดซัลโฟซาลิไซลิก

โดยคำนึงถึงความผันผวนที่เด่นชัดของระดับโปรตีนในปัสสาวะในช่วงเวลาต่างๆ ของวัน รวมถึงการพึ่งพาความเข้มข้นของโปรตีนในปัสสาวะในการขับปัสสาวะ เนื้อหาที่แตกต่างกันในแต่ละส่วนของปัสสาวะในปัจจุบันด้วยพยาธิสภาพของไต เป็นธรรมเนียมในการประเมินความรุนแรงของโปรตีนในปัสสาวะโดยการสูญเสียโปรตีนในปัสสาวะทุกวัน นั่นคือ เพื่อกำหนดสิ่งที่เรียกว่าโปรตีนในปัสสาวะรายวัน มันแสดงเป็นกรัม / วัน

หากไม่สามารถเก็บปัสสาวะได้ทุกวัน ขอแนะนำให้กำหนดความเข้มข้นของโปรตีนและครีเอตินีนในปัสสาวะส่วนเดียว เนื่องจากอัตราการขับครีเอตินีนในระหว่างวันค่อนข้างคงที่และไม่ขึ้นอยู่กับการเปลี่ยนแปลงของอัตราการถ่ายปัสสาวะ อัตราส่วนของความเข้มข้นของโปรตีนต่อความเข้มข้นของครีเอตินีนจึงคงที่ อัตราส่วนนี้สัมพันธ์กันดีกับการขับโปรตีนในแต่ละวัน ดังนั้นจึงสามารถใช้ประเมินความรุนแรงของโปรตีนในปัสสาวะได้ โดยปกติอัตราส่วนโปรตีน / ครีเอตินินควรน้อยกว่า 0.2 โปรตีนและครีเอตินินถูกวัดเป็น g / L ข้อได้เปรียบที่สำคัญของวิธีการประเมินความรุนแรงของโปรตีนในปัสสาวะโดยอัตราส่วนระหว่างโปรตีนกับครีเอตินีนคือการกำจัดข้อผิดพลาดที่เกี่ยวข้องกับความเป็นไปไม่ได้หรือการเก็บปัสสาวะที่ไม่สมบูรณ์ในแต่ละวัน

วรรณกรรม:

OV Novoselova, MB Pyatigorskaya, Yu. E. Mikhailov, "ลักษณะทางคลินิกของการตรวจหาและประเมินโปรตีนในปัสสาวะ", คู่มือของหัวหน้า CDL, ฉบับที่ 1, มกราคม 2550
A. V. Kozlov, "Proteinuria: วิธีการตรวจหา", การบรรยาย, เซนต์ปีเตอร์สเบิร์ก, SPbMAPO, 2000
VL Emanuel "การวินิจฉัยโรคไตในห้องปฏิบัติการ โรคทางเดินปัสสาวะ ", - คู่มือหัวหน้า CDL ฉบับที่ 12 ธันวาคม 2549
ในและ. พัพโคว่า, แอล.เอ็ม. Prasolova - การหาโปรตีนในปัสสาวะและน้ำไขสันหลัง Koltsovo, 2007
คู่มือวิธีการวิจัยทางห้องปฏิบัติการทางคลินิก. เอ็ด. อี.เอ.คอสท์. มอสโก "ยา", 1975

โปรตีนจำนวนเล็กน้อยในปัสสาวะทุกวันยังพบได้ในบุคคลที่มีสุขภาพแข็งแรงสมบูรณ์ อย่างไรก็ตาม วิธีการที่ใช้อยู่ในปัจจุบันไม่พบความเข้มข้นเพียงเล็กน้อยดังกล่าวในส่วนเดียว ประมาณ 70% ของโปรตีนในปัสสาวะของคนที่มีสุขภาพดีคือ uromucoid ซึ่งเป็นโปรตีนที่สร้างจากเนื้อเยื่อไต ดังนั้นสัดส่วนของโปรตีนไตในปัสสาวะของคนที่มีสุขภาพดีจึงน้อยมาก และโปรตีนในปัสสาวะปกติคือ 50-150 มก. / วัน และโปรตีนส่วนใหญ่ในปัสสาวะก็เหมือนกับโปรตีนในซีรัม

เป็นเรื่องปกติที่จะแยกแยะระหว่างโปรตีนในรูปแบบต่อไปนี้ขึ้นอยู่กับแหล่งกำเนิด: ก่อนวัยอันควรที่เกี่ยวข้องกับการสลายโปรตีนในเนื้อเยื่อที่เพิ่มขึ้นการแตกของเม็ดเลือดแดงเด่นชัด; ไตเนื่องจากพยาธิสภาพของไตซึ่งสามารถแบ่งออกเป็นไตและท่อ postrenal เกี่ยวข้องกับพยาธิสภาพของทางเดินปัสสาวะและส่วนใหญ่มักเกิดจากการอักเสบ

ขึ้นอยู่กับระยะเวลาของการดำรงอยู่ โปรตีนในปัสสาวะถาวรจะถูกแยกออกซึ่งมีอยู่หลายสัปดาห์หรือหลายปีและชั่วคราวซึ่งปรากฏขึ้นเป็นระยะบางครั้งถึงแม้จะไม่มีพยาธิสภาพของไตเช่นมีไข้และมึนเมารุนแรง ขอแนะนำให้แยกความแตกต่างระหว่างความแปรปรวนของโปรตีนในปัสสาวะ: ด้วยการสูญเสียโปรตีนรายวันสูงถึง 1 กรัม - ปานกลาง, จาก 1 ถึง 3 กรัม - เฉลี่ยและมากกว่า 3 กรัม - เด่นชัด

การตรวจหาโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลค่อนข้างสูงในปัสสาวะบ่งชี้ว่าไม่มีการคัดเลือกของตัวกรองไตและความเสียหายที่เด่นชัด ในกรณีเหล่านี้ พวกเขาพูดถึงการเลือกโปรตีนในปัสสาวะต่ำ ดังนั้นในปัจจุบัน การหาปริมาณโปรตีนในปัสสาวะจึงเป็นที่แพร่หลาย วิธีการอิเล็กโตรโฟรีซิสที่แม่นยำที่สุดในแป้งและเจลโพลีอะคริลาไมด์
จากผลลัพธ์ที่ได้จากวิธีการเหล่านี้ เราสามารถตัดสินการเลือกโปรตีนในปัสสาวะได้

วิธีการเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณส่วนใหญ่สำหรับการกำหนดโปรตีนในปัสสาวะนั้นขึ้นอยู่กับการแข็งตัวของเลือดในปริมาตรของปัสสาวะหรือที่ส่วนต่อประสานระหว่างตัวกลาง (ปัสสาวะและกรด) หากมีวิธีวัดความเข้มของการแข็งตัวของเลือด ตัวอย่างจะกลายเป็นเชิงปริมาณ

ตัวอย่างมาตรฐานด้วยกรดซัลโฟซาลิไซลิก:

รีเอเจนต์ที่จำเป็น:

สารละลายกรดซัลโฟซาลิไซลิก 20%

ความคืบหน้าการวิจัย:

เทปัสสาวะที่กรองแล้ว 3 มล. ลงใน 2 หลอดทดลอง เติมน้ำยา 6-8 หยดลงในหลอดทดลอง เทียบกับพื้นหลังสีเข้ม ให้เปรียบเทียบหลอดควบคุมกับหลอดทดลอง ความขุ่นในหลอดทดลองบ่งชี้ว่ามีโปรตีนอยู่ ตัวอย่างถือเป็นบวก

หากปฏิกิริยาของปัสสาวะเป็นด่าง ก่อนการศึกษาจะถูกทำให้เป็นกรดด้วยสารละลายกรดอะซิติก 10% 2-3 หยด

วิธี Unified Brandberg-Roberts-Stolnikov:

วิธีนี้ใช้การทดสอบวงแหวน Geller ซึ่งประกอบด้วยความจริงที่ว่าที่ส่วนติดต่อของกรดไนตริกและปัสสาวะเมื่อมีโปรตีนเกิดการแข็งตัวและวงแหวนสีขาวจะปรากฏขึ้น

รีเอเจนต์ที่จำเป็น:

สารละลายกรดไนตริก 30% (ความหนาแน่นสัมพัทธ์ 1.2) หรือน้ำยาของ Larionova
การเตรียมน้ำยาของ Larionova: โซเดียมคลอไรด์ 20-30 กรัมละลายโดยการให้ความร้อนในน้ำกลั่น 100 มล. ปล่อยให้เย็นและกรอง ในการกรอง 99 มล. เติมกรดไนตริกเข้มข้น 1 มล.

ความคืบหน้าการวิจัย:

กรดไนตริก 1-2 มล. (หรือน้ำยาของ Larionova) ถูกเทลงในหลอดทดลองและปัสสาวะที่กรองแล้วจำนวนเท่ากันจะถูกจัดชั้นอย่างระมัดระวังตามผนังของหลอดทดลอง การปรากฏตัวของวงแหวนสีขาวบาง ๆ ที่ขอบของของเหลวทั้งสองระหว่าง 2 ถึง 3 นาทีบ่งชี้ว่ามีโปรตีนอยู่ที่ความเข้มข้นประมาณ 0.033 กรัมต่อลิตร หากแหวนปรากฏขึ้นเร็วกว่า 2 นาทีหลังการเคลือบ ปัสสาวะควรเจือจางด้วยน้ำและจัดชั้นใหม่ของปัสสาวะที่เจือจางแล้ว ระดับการเจือจางของปัสสาวะจะถูกเลือกขึ้นอยู่กับชนิดของแหวนคือ ความกว้าง ความกะทัดรัด และเวลาที่ปรากฏ ด้วยวงแหวนคล้ายเกลียวซึ่งปรากฏก่อนหน้า 2 นาทีปัสสาวะจะเจือจาง 2 ครั้งโดยกว้าง - 4 เท่ามีขนาดกะทัดรัด - 8 เท่าเป็นต้น ในกรณีนี้ ความเข้มข้นของโปรตีนคำนวณโดยการคูณ 0.033 ด้วยระดับการเจือจางและแสดงเป็นกรัมต่อลิตร (g / l)

บางครั้งได้วงแหวนสีขาวเมื่อมียูเรตจำนวนมาก ตรงกันข้ามกับวงแหวนโปรตีน เกลือยูเรตปรากฏเหนือส่วนต่อประสานระหว่างของเหลวสองชนิดเล็กน้อยและละลายเมื่อให้ความร้อนอย่างอ่อนโยน

การหาปริมาณโปรตีนในปัสสาวะโดยความขุ่นที่เกิดจากการเพิ่มกรดซัลโฟซาลิไซลิก:

หลักการวิธีการ:

ความเข้มของความขุ่นในระหว่างการจับตัวเป็นก้อนของโปรตีนด้วยกรดซัลโฟซาลิไซลิกนั้นแปรผันตามความเข้มข้น

รีเอเจนต์ที่จำเป็น:

สารละลายกรดซัลโฟซาลิไซลิก 1.3%

2. สารละลายโซเดียมคลอไรด์ 0.9%

3. สารละลายอัลบูมินมาตรฐาน - สารละลาย 1% (สารละลาย 1 มิลลิลิตรที่มีอัลบูมิน 10 มก.): อัลบูมินที่แช่เยือกแข็ง 1 กรัม (จากซีรั่มของมนุษย์หรือวัว) ละลายในสารละลายโซเดียมคลอไรด์ 0.9% จำนวนเล็กน้อยในขวดที่มี ความจุ 100 มล. แล้วนำไปทำเครื่องหมายด้วยสารละลายเดียวกัน รีเอเจนต์เสถียรโดยเติมสารละลายโซเดียมเอไซด์ (NaN3) 5% 1 มล. เมื่อเก็บไว้ในตู้เย็น น้ำยาจะใช้งานได้ภายใน 2 เดือน

อุปกรณ์พิเศษ - โฟโตอิเล็กทริกคัลเลอริมิเตอร์

ความคืบหน้าการวิจัย:

เติมปัสสาวะที่กรองแล้ว 1.25 มล. ลงในหลอดทดลอง เติม 5 มล. ด้วยสารละลายกรดซัลโฟซาลิไซลิก 3% ผสม หลังจากผ่านไป 5 นาที จะมีการวัดบนโฟโตอิเล็กทริกคัลเลอริมิเตอร์ที่ความยาวคลื่น 590-650 นาโนเมตร (ฟิลเตอร์สีส้มหรือสีแดง) เทียบกับตัวควบคุมในคิวเวตต์ที่มีความยาวเส้นทางแสง 5 มม. หลอดทดลองทำหน้าที่เป็นตัวควบคุม โดยเติมสารละลายโซเดียมคลอไรด์ 0.9% ลงในปัสสาวะที่กรองแล้ว 1.25 มล. เป็น 5 มล. การคำนวณจะดำเนินการตามตารางการสอบเทียบสำหรับการก่อสร้างซึ่งเตรียมการเจือจางจากสารละลายมาตรฐานตามที่ระบุไว้ในตาราง

1.25 มล. ถูกนำมาจากสารละลายที่ได้รับและประมวลผลเป็นตัวอย่างทดลอง

การพึ่งพาเส้นตรงเมื่อสร้างกราฟการสอบเทียบจะคงอยู่ได้ถึง 1 g / l ที่ความเข้มข้นสูง ควรเจือจางตัวอย่างและพิจารณาการเจือจางในการคำนวณด้วย

ผลบวกที่เป็นเท็จสามารถหาได้หากมีสารคอนทราสต์ที่มีไอโอดีนอินทรีย์อยู่ในปัสสาวะ ดังนั้นจึงไม่สามารถใช้การทดสอบนี้กับผู้ที่เตรียมสารไอโอดีนได้ ผลบวกเท็จอาจเกิดจากยาซัลฟา เพนนิซิลลินปริมาณสูง และกรดยูริกในปัสสาวะสูง

วิธีไบยูเรต:

หลักการวิธีการ:

พันธะโปรตีนของเปปไทด์กับเกลือทองแดงในอัลคาไลน์ c ก่อตัวเป็นไวโอเล็ตคอมเพล็กซ์ โปรตีนถูกตกตะกอนล่วงหน้าด้วยกรดไตรคลอโรอะซิติก

รีเอเจนต์ที่จำเป็น:

1. สารละลาย 10% ของกรดไตรคลอโรอะซิติก
สารละลายทองแดง 2.20% (CuSO4 ∙ 5H2O)
สารละลาย NaOH 3.3%

ความคืบหน้าการวิจัย:

ในปัสสาวะ 5 มล. จากปริมาณรายวันให้เติมสารละลายกรดไตรคลอโรอะซิติก 3 มล. แล้วปั่นแยกให้เป็นตะกอนในปริมาณคงที่ ของเหลวเหนือตะกอนจะถูกดูดออกด้วยปิเปต จากนั้นตะกอนจะถูกละลายในสารละลาย NaOH 5 มล. เติม CuSO4 0.25 มล. ลงในสารละลายผสมให้เข้ากันแล้วปั่นเหวี่ยง ของเหลวเหนือตะกอนเป็นโฟโตเมตริกที่ 540 นาโนเมตรในคิวเวตต์ที่มีความยาวเส้นทางแสง 10 มม. เทียบกับน้ำกลั่น ความเข้มข้นของโปรตีนคำนวณโดยใช้กราฟการปรับเทียบ เมื่อวางแผนความเข้มข้นของโปรตีน (g / l) บนพิกัด และการดูดกลืนแสงในหน่วยการสูญพันธุ์บน abscissa จากความเข้มข้นที่ได้รับ จะคำนวณการสูญเสียโปรตีนในปัสสาวะทุกวัน

การใช้กระดาษแสดงสถานะ (แถบ):

สามารถตรวจจับโปรตีนได้โดยใช้กระดาษบ่งชี้ (แถบ) ที่ผลิตโดย Albuphan, Ames (อังกฤษ), Albustix, Boehringer (เยอรมนี), Comburtest เป็นต้น

หลักการนี้ขึ้นอยู่กับปรากฏการณ์ที่เรียกว่าข้อผิดพลาดของโปรตีนของตัวบ่งชี้กรดเบส ส่วนตัวบ่งชี้ของกระดาษชุบด้วยเตตระโบรโมฟีนอลสีน้ำเงินและบัฟเฟอร์ซิเตรต เมื่อกระดาษชุบน้ำ บัฟเฟอร์จะละลายและให้ค่า pH ที่เหมาะสมเพื่อให้ตัวบ่งชี้ทำปฏิกิริยา

ที่โปรตีนกลุ่มอะมิโน 3.0-3.5 จะทำปฏิกิริยากับตัวบ่งชี้และเปลี่ยนสีเหลืองเริ่มแรกเป็นสีเขียวแกมน้ำเงิน หลังจากนั้นเมื่อเปรียบเทียบกับระดับสี เป็นไปได้ที่จะประเมินความเข้มข้นของโปรตีนในปัสสาวะโดยคร่าวๆ ข้อกำหนดเบื้องต้นเบื้องต้นสำหรับการทำงานที่ถูกต้องของแผ่นทดสอบคือการรักษาค่า pH ให้อยู่ในช่วง 3.0-3.5 เพื่อให้ปฏิกิริยาดำเนินต่อไป

หากกระดาษสัมผัสกับปัสสาวะภายใต้การศึกษานานกว่าการสัมผัสที่ระบุในคำแนะนำ บัฟเฟอร์ซิเตรตจะละลายในนั้น จากนั้นตัวบ่งชี้จะตอบสนองต่อ pH ที่แท้จริงของปัสสาวะ กล่าวคือ ให้ปฏิกิริยาบวกที่ผิดพลาด เนื่องจากความจุบัฟเฟอร์มีจำกัด แม้ว่าจะปฏิบัติตามแนวทางปฏิบัติ ผลลัพธ์ที่เป็นเท็จจะได้รับในตัวอย่างปัสสาวะที่มีความเป็นด่างมากเกินไป (pH> 6.5) และในตัวอย่างปัสสาวะที่เป็นกรดเกินไป (pH)
จำนวนกลุ่มอะมิโนที่ทำปฏิกิริยาในองค์ประกอบของโปรตีนแต่ละชนิดแตกต่างกัน ดังนั้นอัลบูมินจึงมีปฏิกิริยารุนแรงกว่า γ-globulins จำนวน 2 เท่า (โปรตีน Bens-Jones, paraproteins) และเข้มข้นกว่าไกลโคโปรตีนมาก อย่างไรก็ตาม เมื่อมีเมือกจำนวนมากที่มีไกลโคโปรตีนสูง (ที่มีการอักเสบของทางเดินปัสสาวะ) สะเก็ดเมือกที่ติดอยู่บนแถบทดสอบสามารถให้ผลบวกที่ผิดพลาดได้

ความไวของชุดการผลิตแต่ละชุดของกระดาษบ่งชี้ เช่นเดียวกับกระดาษแต่ละประเภทที่ผลิตโดยบริษัทเดียวกัน อาจแตกต่างกัน ดังนั้นการประเมินเชิงปริมาณของโปรตีนด้วยวิธีนี้จึงควรได้รับการปฏิบัติด้วยความระมัดระวัง การระบุการสูญเสียโปรตีนในปัสสาวะทุกวันโดยใช้กระดาษบ่งชี้นั้นเป็นไปไม่ได้ ดังนั้น กระดาษตัวบ่งชี้จึงด้อยกว่าตัวอย่างเคมี โดยหลักแล้วคือตัวอย่างที่มีกรดซัลโฟซาลิไซลิก แม้ว่าจะช่วยให้ศึกษาชุดตัวอย่างได้อย่างรวดเร็ว

การตรวจหาโปรตีน Bens-Jones ในปัสสาวะ:

โปรตีน Bens-Jones สามารถขับออกทางปัสสาวะด้วย multiple myeloma ซึ่งเป็น macroglobulinemia ของ Waldenstrom

แนะนำให้ทำการศึกษาเฉพาะกับการทดสอบเชิงบวกกับกรดซัลโฟซาลิไซลิกเท่านั้น กระดาษทดสอบโปรตีน Bens-Jones ไม่เหมาะ

หลักการ:

ขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาการตกตะกอนด้วยอุณหภูมิ วิธีการที่การสลายตัวของโปรตีน Bens-Jones ที่อุณหภูมิ 100 ° C หรือการตกตะกอนซ้ำด้วยการระบายความร้อนในภายหลังนั้นไม่น่าเชื่อถือเนื่องจากโปรตีน Bens-Jones ไม่ใช่ทั้งหมดมีคุณสมบัติที่สอดคล้องกัน การระบุที่น่าเชื่อถือที่สุดของ paraprotein คือการตกตะกอนที่อุณหภูมิ 40-60 ° C แต่แม้ภายใต้สภาวะเหล่านี้ ปริมาณน้ำฝนอาจไม่เกิดขึ้นในปัสสาวะที่เป็นกรดมากเกินไป (pH 6.5) ที่ความหนาแน่นสัมพัทธ์ของปัสสาวะต่ำและที่ระดับต่ำ ความเข้มข้นของโปรตีน Bens-Jones

รีเอเจนต์ที่จำเป็น:

2 M อะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 4.9

ความคืบหน้าการวิจัย:

ปัสสาวะที่กรองแล้วจำนวน 4 มล. ผสมกับบัฟเฟอร์ 1 มล. และอุ่นเป็นเวลา 15 นาทีในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 56 องศาเซลเซียส ในการปรากฏตัวของโปรตีน Bens-Jones ตะกอนที่เด่นชัดจะปรากฏขึ้นภายใน 2 นาที ด้วยความเข้มข้นของโปรตีน Bence-Jones ที่น้อยกว่า 3 g / l ตัวอย่างอาจเป็นค่าลบ ในทางปฏิบัติ พบได้น้อยมาก เนื่องจากความเข้มข้นของโปรตีน Bence-Jones ในปัสสาวะส่วนใหญ่มีความสำคัญ

ด้วยความน่าเชื่อถืออย่างสมบูรณ์ โปรตีน Bens-Jones สามารถตรวจพบได้โดยการวิจัย immunoelectrophoretic โดยใช้ซีรั่มเฉพาะเพื่อต่อต้านอิมมูโนโกลบูลินที่หนักและเบา

คำจำกัดความของ albumosis (โปรตีน):

อัลบูโมสเป็นผลิตภัณฑ์สลายโปรตีนซึ่งมีพื้นฐานมาจากความจริงที่ว่าพวกมันไม่พับเมื่อเดือด แต่ให้ปฏิกิริยาไบยูเร็ตในเชิงบวกและเกลือบางชนิดโดยเฉพาะอย่างยิ่งแอมโมเนียมซัลเฟตและสังกะสีอะซิเตทในตัวกลางที่เป็นกรด

ปัสสาวะปกติไม่มีอัลบูโมซิส ร่องรอยสามารถพบได้ในปัสสาวะปกติในกรณีที่มีการปนเปื้อนของน้ำอสุจิ ในทางพยาธิวิทยา อัลบูโมซิสสามารถเกิดขึ้นได้ในปัสสาวะในช่วงที่มีไข้ การถ่ายเลือดและพลาสมา การสลายของ exudates และ transudates และการสลายตัวของเนื้องอก

รีเอเจนต์ที่จำเป็น:

1. สารละลายโซเดียมคลอไรด์อิ่มตัว
2. สารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์เข้มข้น
3. สารละลายคอปเปอร์ซัลเฟตที่อ่อนแอ (เกือบไม่มีสี)

ความคืบหน้าการวิจัย:

สารละลายโซเดียมคลอไรด์อิ่มตัว (ปริมาตร 1/3) ถูกเติมลงในปัสสาวะที่ทำให้เป็นกรดด้วยกรดอะซิติก ต้มและกรองของเหลวร้อน อัลบูโมสผ่านเข้าไปในตัวกรองซึ่งการปรากฏตัวของพวกมันถูกกำหนดโดยปฏิกิริยาไบยูเรต สารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์เข้มข้น 1/2 ปริมาตรและสารละลายทองแดงซัลเฟตอ่อนสองสามหยดลงในตัวกรอง ผลการทดสอบในเชิงบวกคือสีแดงอมม่วง

หากการทดสอบเป็นบวกด้วยกรดซัลโฟซาลิไซลิก ปัสสาวะจะถูกทำให้ร้อน หากความขุ่นมัวหายไปและปรากฏขึ้นอีกครั้งเมื่อเย็นลง แสดงว่าปัสสาวะมีโปรตีนจากโปรตีนจากโปรตีนขาวหรือโปรตีน Bens-Jones

พบโปรตีนจำนวนเล็กน้อยในปัสสาวะทุกวันในบุคคลที่มีสุขภาพดี อย่างไรก็ตาม ไม่สามารถตรวจพบความเข้มข้นขนาดเล็กดังกล่าวได้โดยใช้วิธีการวิจัยแบบเดิม การปล่อยโปรตีนจำนวนมากขึ้น ซึ่งการทดสอบคุณภาพปกติสำหรับโปรตีนในปัสสาวะกลายเป็นผลบวก เรียกว่าโปรตีนในปัสสาวะ แยกแยะระหว่างโปรตีนในไต (จริง) และโปรตีนนอกไต (เท็จ) ในโปรตีนในไตโปรตีนจะเข้าสู่ปัสสาวะโดยตรงจากเลือดเนื่องจากการกรองที่เพิ่มขึ้นโดย glomeruli ของไตหรือการลดลงของ reabsorption ของท่อ

โปรตีนในไต (จริง) ของไต

โปรตีนในไต (จริง) ของไตนั้นทำงานและเป็นสารอินทรีย์ ในบรรดาโปรตีนในไตที่ทำงานได้มักพบประเภทต่อไปนี้:

โปรตีนในปัสสาวะทางสรีรวิทยาของทารกแรกเกิดซึ่งจะหายไปในวันที่ 4-10 หลังคลอดและในทารกที่คลอดก่อนกำหนดเพียงเล็กน้อยในภายหลัง
- อัลบูมินูเรียมีพยาธิสภาพซึ่งเป็นลักษณะของเด็กอายุ 7-18 ปีและปรากฏเฉพาะในตำแหน่งตั้งตรงของร่างกาย
- อัลบูมินูเรียชั่วคราว (จังหวะ) ซึ่งอาจเกิดจากโรคต่าง ๆ ของระบบย่อยอาหาร, โรคโลหิตจางรุนแรง, แผลไฟไหม้, การบาดเจ็บหรือปัจจัยทางสรีรวิทยา: การออกแรงหนัก, ภาวะอุณหภูมิต่ำ, อารมณ์รุนแรง, ความอุดมสมบูรณ์, อาหารที่อุดมด้วยโปรตีน ฯลฯ

โปรตีนในปัสสาวะอินทรีย์ (ไต) สังเกตได้จากการผ่านโปรตีนจากเลือดผ่านบริเวณที่เสียหายของ endothelium ของ glomeruli ไตในโรคไต (glomerulonephritis, nephrosis, nephrosclerosis, amyloidosis, nephropathy ของหญิงตั้งครรภ์), ความผิดปกติของไต (ความดันโลหิตสูงในไต, ภาวะขาดออกซิเจน) (จำนวนทางโภชนาการและพิษของยา) ผลกระทบต่อผนังของเส้นเลือดฝอยของ glomeruli

โปรตีนในปัสสาวะจากภายนอก (เท็จ)

โปรตีนในปัสสาวะจากภายนอกไต (เท็จ) ซึ่งแหล่งที่มาของโปรตีนในปัสสาวะคือส่วนผสมของเม็ดเลือดขาว, เม็ดเลือดแดง, แบคทีเรีย, เซลล์ยูโรทีเลียม พบในโรคระบบทางเดินปัสสาวะ (urolithiasis, วัณโรคไต, เนื้องอกในไตและทางเดินปัสสาวะ ฯลฯ )

การหาโปรตีนในปัสสาวะ

วิธีการเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณส่วนใหญ่สำหรับการตรวจหาโปรตีนในปัสสาวะนั้นขึ้นอยู่กับการแข็งตัวของเลือดในปริมาตรของปัสสาวะหรือที่ส่วนต่อประสานระหว่างตัวกลาง (ปัสสาวะและกรด)

ในบรรดาวิธีการเชิงคุณภาพสำหรับการตรวจปัสสาวะที่มีปัญหา การทดสอบที่แพร่หลายที่สุดคือการทดสอบแบบรวมศูนย์ด้วยกรดซัลโฟซาลิไซลิกและการทดสอบวงแหวนเกลเลอร์

การทดสอบมาตรฐานด้วยกรดซัลฟาซาลิไซลิกดำเนินการดังนี้ เทปัสสาวะที่กรองแล้ว 3 มล. ลงใน 2 หลอดทดลอง หนึ่งในนั้นเพิ่ม 6-8 หยดของสารละลาย 20% ของกรดซัลฟาซาลิไซลิก เปรียบเทียบทั้งสองหลอดกับพื้นหลังสีเข้ม ปัสสาวะขุ่นในหลอดกรดซัลฟาซาลิไซลิกบ่งชี้ว่ามีโปรตีนอยู่ ก่อนการศึกษา จำเป็นต้องตรวจสอบปฏิกิริยาของปัสสาวะ และหากเป็นด่าง ให้ทำกรดด้วยสารละลายกรดอะซิติก 10% 2-3 หยด

การทดสอบของ Geller ขึ้นอยู่กับความจริงที่ว่าเมื่อมีโปรตีนในปัสสาวะที่ส่วนต่อประสานระหว่างกรดไนตริกกับปัสสาวะจะจับตัวเป็นก้อนและมีวงแหวนสีขาวปรากฏขึ้น 1-2 มล. ของสารละลายกรดไนตริก 30% เทลงในหลอดทดลองและปัสสาวะที่กรองแล้วจำนวนเท่ากันบนผนังของหลอดทดลองอย่างระมัดระวัง การปรากฏตัวของวงแหวนสีขาวที่ขอบของของเหลวทั้งสองบ่งชี้ว่ามีโปรตีนในปัสสาวะ ควรจำไว้ว่าบางครั้งวงแหวนสีขาวจะก่อตัวขึ้นเมื่อมีกรดยูริกในปริมาณมาก แต่ต่างจากวงแหวนโปรตีนที่ปรากฏขึ้นเหนือขอบเขตระหว่างของเหลวสองชนิดเล็กน้อยและละลายเมื่อถูกความร้อน [Pletneva NG, 1987]

วิธีการเชิงปริมาณที่ใช้บ่อยที่สุดคือ:

1) วิธี Brandberg-Roberts-Stolnikov แบบครบวงจรซึ่งอิงตามการทดสอบวงแหวน Geller
2) วิธีโฟโตอิเล็กทริกคัลเลอริเมตริกสำหรับการกำหนดปริมาณโปรตีนในปัสสาวะโดยความขุ่นที่เกิดขึ้นเมื่อเติมกรดซัลฟาซาลิไซลิก
3) วิธีไบยูเรต

การตรวจจับโปรตีนในปัสสาวะโดยวิธีเร่งแบบง่ายนั้นดำเนินการโดยวิธีคัลเลอริเมตริกโดยใช้กระดาษบ่งชี้ที่ผลิตโดยบริษัท Lachema (สโลวาเกีย), Albuphan, Ames (อังกฤษ), Albustix, Boehringer (เยอรมนี), Comburtest และอื่นๆ วิธีการ ประกอบด้วยการแช่ในปัสสาวะของแถบกระดาษพิเศษที่แช่ใน tetrabromophenol blue และ citrate buffer ซึ่งจะเปลี่ยนสีจากสีเหลืองเป็นสีน้ำเงินขึ้นอยู่กับปริมาณโปรตีนในปัสสาวะ ความเข้มข้นของโปรตีนโดยประมาณในปัสสาวะที่ศึกษาจะถูกกำหนดโดยใช้มาตราส่วนมาตรฐาน เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่ถูกต้อง ต้องเป็นไปตามเงื่อนไขต่อไปนี้ pH ของปัสสาวะควรอยู่ในช่วง 3.0-3.5; ปัสสาวะที่มีความเป็นด่างมากเกินไป (pH 6.5) จะส่งผลให้เกิดผลบวกที่ผิดพลาด และหากปัสสาวะมีความเป็นกรดมากเกินไป (pH 3.0) ผลลัพธ์เชิงลบที่เป็นเท็จ

กระดาษจะต้องสัมผัสกับปัสสาวะเพื่อทำการทดสอบไม่เกินที่ระบุไว้ในคำแนะนำ มิฉะนั้น การทดสอบจะทำให้เกิดปฏิกิริยาบวกที่ผิดพลาด ระยะหลังยังสังเกตได้เมื่อมีเมือกในปัสสาวะเป็นจำนวนมาก ความไวของกระดาษประเภทต่างๆ และแต่ละชุดอาจแตกต่างกัน ดังนั้น การประเมินปริมาณโปรตีนในปัสสาวะด้วยวิธีนี้จึงควรได้รับการปฏิบัติด้วยความระมัดระวัง การกำหนดปริมาณในปัสสาวะทุกวันโดยใช้กระดาษบ่งชี้เป็นไปไม่ได้ [Pletneva NG, 1987]

ความมุ่งมั่นของโปรตีนในชีวิตประจำวัน

มีหลายวิธีในการกำหนดปริมาณโปรตีนที่ขับออกทางปัสสาวะต่อวัน วิธีที่ง่ายที่สุดคือวิธี Brandberg-Roberts-Stolnikov

ระเบียบวิธีปัสสาวะผสมอย่างทั่วถึง 5-10 มล. ลงในหลอดทดลองทุกวันและเติมสารละลายกรดไนตริก 30% อย่างระมัดระวังตามผนัง เมื่อมีโปรตีนในปัสสาวะในปริมาณ 0.033% (เช่น 33 มก. ต่อ 1 ลิตรของปัสสาวะ) วงแหวนสีขาวบาง ๆ แต่มองเห็นได้ชัดเจนจะปรากฏขึ้นหลังจากผ่านไป 2-3 นาที ที่ความเข้มข้นต่ำกว่า ตัวอย่างจะเป็นลบ ด้วยปริมาณโปรตีนในปัสสาวะที่สูงขึ้น ปริมาณจะถูกกำหนดโดยการเจือจางปัสสาวะซ้ำๆ ด้วยน้ำกลั่นจนกว่าวงแหวนจะหยุดก่อตัว ในหลอดทดลองสุดท้ายซึ่งยังคงมองเห็นวงแหวนได้ ความเข้มข้นของโปรตีนจะอยู่ที่ 0.033% คูณ 0.033 ด้วยอัตราการเจือจางของปัสสาวะ กำหนดปริมาณโปรตีนในปัสสาวะที่ไม่เจือปน 1 ลิตรในหน่วยกรัม จากนั้นคำนวณปริมาณโปรตีนในปัสสาวะทุกวันโดยใช้สูตร:

K = (x V) / 1,000

โดยที่ K คือปริมาณโปรตีนในปัสสาวะทุกวัน (g); x คือปริมาณโปรตีนในปัสสาวะ 1 ลิตร (g); V คือปริมาณปัสสาวะที่ขับออกมาต่อวัน (มล.)

โดยปกติ 27 ถึง 150 มก. (โดยเฉลี่ย 40-80 มก.) ของโปรตีนจะถูกขับออกทางปัสสาวะในระหว่างวัน

การทดสอบนี้ช่วยให้คุณกำหนดโปรตีนที่ดี (อัลบูมิน) ในปัสสาวะเท่านั้น วิธีการเชิงปริมาณที่แม่นยำยิ่งขึ้น (วิธีคัลเลอริเมตริกของเจลดาห์ล ฯลฯ) ค่อนข้างซับซ้อนและต้องใช้อุปกรณ์พิเศษ

ในโปรตีนในไต ไม่เพียงแต่อัลบูมินจะถูกขับออกทางปัสสาวะเท่านั้น แต่ยังรวมถึงโปรตีนประเภทอื่นๆ ด้วย โปรตีนแกรมปกติ (ตาม Seitz et al., 1953) มีเปอร์เซ็นต์ดังต่อไปนี้: อัลบูมิน - 20%, α 1 -โกลบูลิน - 12%, α 2 -โกลบูลิน - 17%, γ-โกลบูลิน - 43% และ β-โกลบูลิน - 8% ... อัตราส่วนของอัลบูมินต่อโกลบูลินเปลี่ยนแปลงในโรคไตต่างๆ เช่น ความสัมพันธ์เชิงปริมาณระหว่างเศษส่วนของโปรตีนถูกรบกวน

วิธีการทั่วไปในการแยกส่วนของ uroproteins มีดังต่อไปนี้: การแยกเกลือออกด้วยเกลือที่เป็นกลาง, การแยกส่วนอิเล็กโตรโฟรีติก, วิธีการทางภูมิคุ้มกัน (ภูมิคุ้มกันในแนวรัศมีตาม Mancini, การวิเคราะห์ทางอิมมูโนอิเล็กโทรโฟเรติก, การตกตะกอนอิมมูโนอิเล็กโทรโฟรีซิส), โครมาโตกราฟี, การกรองเจล และการหมุนเหวี่ยงด้วยความร้อนสูง

ในการเชื่อมต่อกับการแนะนำวิธีการแยกส่วนของ uroproteins ตามการศึกษาการเคลื่อนที่ของอิเล็กโตรโฟเรติกความแปรปรวนของน้ำหนักโมเลกุลขนาดและรูปร่างของโมเลกุล uroprotein จึงเป็นไปได้ที่จะแยกประเภทของโปรตีนในปัสสาวะที่มีลักษณะเฉพาะของโรคเฉพาะเพื่อศึกษาการกวาดล้างของ โปรตีนในพลาสมาแต่ละตัว จนถึงปัจจุบัน มีการระบุโปรตีนในพลาสมามากกว่า 40 รายการในปัสสาวะ รวมถึงโปรตีนในพลาสมา 31 รายการในปัสสาวะปกติ

โปรตีนที่เลือกได้

ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา แนวคิดเรื่องการเลือกโปรตีนในปัสสาวะได้เกิดขึ้น ในปีพ.ศ. 2498 Hardwicke และ Squire ได้กำหนดแนวคิดของโปรตีนในปัสสาวะ "selective" และ "nonselective" โดยพิจารณาว่าการกรองโปรตีนในพลาสมาในปัสสาวะเป็นไปตามรูปแบบที่กำหนด ยิ่งน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีนที่ขับออกมาในปัสสาวะมากเท่าใด การกวาดล้างก็จะยิ่งต่ำลง และความเข้มข้นในปัสสาวะลดลง ปัสสาวะขั้นสุดท้าย โปรตีนในปัสสาวะที่สอดคล้องกับรูปแบบนี้คือการคัดเลือก ตรงกันข้ามกับการไม่คัดเลือก ซึ่งมีลักษณะเฉพาะโดยการบิดเบือนรูปแบบที่ได้รับ

การตรวจหาโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลค่อนข้างสูงในปัสสาวะบ่งชี้ว่าไม่มีการคัดเลือกของตัวกรองไตและความเสียหายที่เด่นชัด ในกรณีเหล่านี้ พวกเขาพูดถึงการเลือกโปรตีนในปัสสาวะต่ำ ดังนั้นในปัจจุบันนี้ การหาปริมาณโปรตีนในปัสสาวะโดยใช้วิธีการอิเล็กโตรโฟรีซิสในแป้งและเจลพอลิอะคริลาไมด์จึงแพร่หลาย จากผลของวิธีการวิจัยเหล่านี้ เราสามารถตัดสินการเลือกโปรตีนในปัสสาวะได้

ตามคำกล่าวของ VS Makhlina (1975) การพิจารณาที่สมเหตุสมผลที่สุดคือการพิจารณาคัดเลือกโปรตีนในปัสสาวะโดยการเปรียบเทียบการกวาดล้างของโปรตีนในพลาสมาในเลือดแต่ละชนิด 6-7 ชนิด (อัลบูมิน ทรานเฟอริน α 2 - มาโครโกลบูลิน IgA IgG, IgM) โดยใช้ความแม่นยำและจำเพาะ วิธีการทางภูมิคุ้มกันเชิงปริมาณของปฏิกิริยาของภูมิคุ้มกันในแนวรัศมีตาม Mancini การวิเคราะห์อิมมูโนอิเล็กโทรโฟเรติกและการตกตะกอนอิมมูโนอิเล็กโทรโฟรีซิส ระดับของการคัดเลือกโปรตีนในปัสสาวะถูกกำหนดโดยดัชนีการคัดเลือกซึ่งเป็นอัตราส่วนของโปรตีนเปรียบเทียบและโปรตีนอ้างอิง (อัลบูมิน)

การศึกษาการกวาดล้างของโปรตีนในพลาสมาแต่ละตัวให้ข้อมูลที่เชื่อถือได้เกี่ยวกับสถานะของเยื่อกรองชั้นใต้ดินของไต glomeruli ความสัมพันธ์ระหว่างธรรมชาติของโปรตีนที่ขับออกมาในปัสสาวะและการเปลี่ยนแปลงในเยื่อหุ้มชั้นใต้ดินของ glomeruli นั้นเด่นชัดและคงที่โดย uroproteinogram เป็นไปได้ที่จะตัดสินการเปลี่ยนแปลงทางพยาธิสรีรวิทยาใน glomeruli ของไตทางอ้อม โดยปกติขนาดรูพรุนเฉลี่ยของเยื่อหุ้มชั้นใต้ดินของไตคือ 2.9-4 A ° NM ซึ่งสามารถส่งผ่านโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูงถึง 10 4 (myoglobulin, α 1 ที่เป็นกรด - ไกลโคโปรตีน, สายเบาอิมมูโนโกลบูลิน, Fc และ Fab - IgG เศษอัลบูมินและทรานเฟอร์ริน)

ด้วย glomerulonephritis, nephrotic syndrome, ขนาดรูพรุนในเยื่อหุ้มชั้นใต้ดินของ glomeruli เพิ่มขึ้นดังนั้นเยื่อหุ้มชั้นใต้ดินจึงสามารถซึมผ่านไปยังโมเลกุลโปรตีนขนาดใหญ่และมวล (ceruloplasmin, haptoglobin, IgG, IgA เป็นต้น) ด้วยระดับความเสียหายที่รุนแรงต่อ glomeruli ของไต โมเลกุลขนาดใหญ่ของโปรตีนในพลาสมาในเลือด (α 2 -macroglobulin, IgM และ β 2 -lipoprotein) ปรากฏในปัสสาวะ

การกำหนดสเปกตรัมโปรตีนของปัสสาวะเป็นไปได้ที่จะสรุปเกี่ยวกับรอยโรคที่เด่นของบางพื้นที่ของเนฟรอน Glomerulonephritis ที่มีรอยโรคเด่นของเยื่อหุ้มชั้นใต้ดินของไตนั้นมีลักษณะโดยการปรากฏตัวของโปรตีนน้ำหนักโมเลกุลขนาดใหญ่และปานกลางในปัสสาวะ pyelonephritis ที่มีแผลเด่นของเยื่อหุ้มชั้นใต้ดินของ tubules นั้นมีลักษณะโดยไม่มีโปรตีนโมเลกุลขนาดใหญ่และการปรากฏตัวของโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลและปานกลางในปริมาณที่เพิ่มขึ้น

β 2 -ไมโครโกลบูลิน

นอกจากโปรตีนที่รู้จักกันดี เช่น อัลบูมิน อิมมูโนโกลบูลิน ไลโปโปรตีน ไฟบริโนเจน, ทรานเฟอร์ริน, ปัสสาวะประกอบด้วยโปรตีนในพลาสมา-ไมโครโปรตีน ซึ่ง β 2 -ไมโครโกลบูลินเป็นที่สนใจทางคลินิก ค้นพบโดยเบิร์กการ์ดและแบร์นในปี 2511 มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำ (น้ำหนักโมเลกุลสัมพัทธ์ 1800) มันไหลผ่านโกลเมอรูไลของ ไตและเกือบทั้งหมดถูกดูดซึมกลับเข้าไปในท่อใกล้เคียง วิธีนี้ช่วยให้สามารถกำหนดปริมาณของ β 2 -microglobulin ในเลือดและปัสสาวะเพื่อตรวจหาการกรองของไตและความสามารถของไตในการดูดซับโปรตีนในท่อใกล้เคียง

ความเข้มข้นของโปรตีนในเลือดและปัสสาวะถูกกำหนดโดย radioimmunoassay โดยใช้ชุดมาตรฐาน "Phade-bas β 2 -mikroiest" (Pharmasia, Sweden) เซรั่มในเลือดของคนที่มีสุขภาพดีมีค่าเฉลี่ย 1.7 มก. / ล. (ผันผวนจาก 0.6 ถึง 3 มก. / ล.) ในปัสสาวะ - เฉลี่ย 81 ไมโครกรัม / ลิตร (สูงสุด 250 ไมโครกรัม / ลิตร) β 2 -ไมโครโกลบูลิน ส่วนเกินในปัสสาวะมากกว่า 1,000 mcg / l เป็นปรากฏการณ์ทางพยาธิวิทยา เนื้อหาของβ 2 -microglobulin ในเลือดเพิ่มขึ้นในโรคที่มาพร้อมกับการกรองไตบกพร่องโดยเฉพาะอย่างยิ่งใน glomerulonephritis เฉียบพลันและเรื้อรัง, โรคไต polycystic, nephrosclerosis, โรคไตจากเบาหวาน, ภาวะไตวายเฉียบพลัน

ความเข้มข้นของβ 2 -microglobulin ในปัสสาวะเพิ่มขึ้นในโรคพร้อมกับการละเมิดฟังก์ชั่นการดูดซึมซ้ำของ tubules ซึ่งนำไปสู่การขับถ่ายในปัสสาวะเพิ่มขึ้น 10-50 เท่าโดยเฉพาะอย่างยิ่งกับ pyelonephritis ไตเรื้อรัง ความล้มเหลว, มึนเมาเป็นหนอง, ฯลฯ เป็นลักษณะที่มีกระเพาะปัสสาวะอักเสบในซึ่งแตกต่างจาก pyelonephritis, ไม่มีการเพิ่มขึ้นของความเข้มข้นของ β 2 -microglobulin ในปัสสาวะ ซึ่งสามารถใช้ในการวินิจฉัยแยกโรคของโรคเหล่านี้ได้ อย่างไรก็ตาม เมื่อแปลผลการศึกษา ควรระลึกไว้เสมอว่าการเพิ่มขึ้นของอุณหภูมิจะมาพร้อมกับการเพิ่มขึ้นของการขับ β 2 -microglobulin ในปัสสาวะเสมอ

โมเลกุลกลางของเลือดและปัสสาวะ

โมเลกุลขนาดกลาง (SM) หรือที่เรียกว่าโปรตีนทอกซิน เป็นสารที่มีน้ำหนักโมเลกุล 500-5000 ดาลตัน โครงสร้างทางกายภาพของพวกเขาไม่เป็นที่รู้จัก CM ประกอบด้วยเปปไทด์อย่างน้อย 30 ตัว ได้แก่ oxytocin, vasopressin, angiotensin, glucagon, adrenocorticotropic hormone (ACTH) เป็นต้น การสะสมของ CM ที่มากเกินไปจะสังเกตได้จากการทำงานของไตลดลงและโปรตีนที่ผิดรูปจำนวนมากและสารเมตาบอลิซึมในเลือด พวกมันมีผลทางชีวภาพที่หลากหลายและเป็นพิษต่อระบบประสาท ทำให้เกิดการกดภูมิคุ้มกันรอง โลหิตจางทุติยภูมิ ยับยั้งการสังเคราะห์โปรตีนและการสร้างเม็ดเลือดแดง ยับยั้งการทำงานของเอนไซม์หลายชนิด และขัดขวางขั้นตอนของกระบวนการอักเสบ

ระดับ CM ในเลือดและปัสสาวะจะพิจารณาจากการตรวจคัดกรอง เช่นเดียวกับการวัดสเปกโตรโฟโตเมตรีในเขตรังสีอัลตราไวโอเลตที่ความยาวคลื่น 254 และ 280 มม. บนเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ DI-8B และไดนามิกสเปกโตรโฟโตเมตรีด้วยการประมวลผลด้วยคอมพิวเตอร์ในช่วงความยาวคลื่น 220-335 นาโนเมตรบนสเปกโตรมิเตอร์เดียวกันจาก Beckman ... บรรทัดฐานใช้เป็นเนื้อหาของ CM ในเลือดเท่ากับ 0.24 ± 0.02 srv หน่วยและในปัสสาวะ - 0.312 ± 0.09 conv. หน่วย
เป็นของเสียปกติของร่างกายพวกเขามักจะถูกกำจัดออกจากมันในเวลากลางคืนโดยการกรองของไต 0.5%; 5% ของพวกเขาถูกกำจัดด้วยวิธีอื่น เศษส่วน CM ทั้งหมดได้รับการดูดกลับแบบท่อ

โปรตีนที่ไม่ใช่พลาสมา (เนื้อเยื่อ) uroproteins

นอกจากโปรตีนในพลาสมาในเลือดแล้ว ปัสสาวะอาจมีโปรตีนที่ไม่ใช่พลาสมา (เนื้อเยื่อ) ตาม Buxbaum และ Franklin (1970) โปรตีนที่ไม่ใช่พลาสมาคิดเป็นประมาณ 2/3 ของไบโอคอลลอยด์ในปัสสาวะทั้งหมดและเป็นส่วนสำคัญของ uroproteins ในโปรตีนในปัสสาวะทางพยาธิวิทยา โปรตีนของเนื้อเยื่อเข้าสู่ปัสสาวะโดยตรงจากไตหรืออวัยวะที่เชื่อมต่อทางกายวิภาคกับทางเดินปัสสาวะหรือจากอวัยวะและเนื้อเยื่ออื่น ๆ เข้าสู่กระแสเลือดและจากมันผ่านเยื่อหุ้มชั้นใต้ดินของ glomeruli ของไตเข้าสู่ปัสสาวะ ในกรณีหลัง การขับโปรตีนเนื้อเยื่อออกทางปัสสาวะคล้ายกับการขับโปรตีนในพลาสมาที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่างๆ องค์ประกอบของ uroproteins ที่ไม่ใช่พลาสมานั้นมีความหลากหลายอย่างมาก ในหมู่พวกเขามีไกลโคโปรตีน, ฮอร์โมน, แอนติเจน, เอนไซม์ (เอนไซม์)

ตรวจพบโปรตีนเนื้อเยื่อในปัสสาวะโดยใช้วิธีการทั่วไปของเคมีโปรตีน (ultracentrifugation, เจลโครมาโตกราฟี, อิเล็กโตรโฟรีซิสประเภทต่างๆ) ปฏิกิริยาจำเพาะต่อเอนไซม์และฮอร์โมน และวิธีการทางภูมิคุ้มกัน หลังยังทำให้สามารถกำหนดความเข้มข้นของ uroprotein ที่ไม่ใช่พลาสมาในปัสสาวะและในบางกรณีเพื่อกำหนดโครงสร้างเนื้อเยื่อที่กลายเป็นแหล่งที่มาของการปรากฏตัวของมัน วิธีการหลักในการตรวจหาโปรตีนที่ไม่ใช่พลาสมาในปัสสาวะคือการวิเคราะห์ภูมิคุ้มกันด้วย antiserum ที่ได้จากการสร้างภูมิคุ้มกันให้กับสัตว์ทดลองด้วยปัสสาวะของมนุษย์ และต่อมาหมด (ดูดซับ) โดยโปรตีนในพลาสมาในเลือด

การศึกษาเอนไซม์ในเลือดและปัสสาวะ

ในกระบวนการทางพยาธิวิทยาจะสังเกตเห็นการรบกวนอย่างลึกซึ้งในกิจกรรมที่สำคัญของเซลล์พร้อมกับการปล่อยเอนไซม์ภายในเซลล์สู่ของเหลวในร่างกาย Enzymodiagnostics ขึ้นอยู่กับการกำหนดเอนไซม์จำนวนหนึ่งที่ปล่อยออกมาจากเซลล์ของอวัยวะที่ได้รับผลกระทบและไม่ใช่ลักษณะของซีรั่มในเลือด
การศึกษาของ nephron ของมนุษย์และสัตว์ได้แสดงให้เห็นว่าในแต่ละส่วนมีความแตกต่างของเอนไซม์สูง ซึ่งสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับหน้าที่ที่แต่ละแผนกดำเนินการ glomeruli ของไตมีเอ็นไซม์หลายชนิดค่อนข้างน้อย

เซลล์ของท่อไตโดยเฉพาะเซลล์ที่อยู่ใกล้เคียงมีเอ็นไซม์ในปริมาณสูงสุด กิจกรรมระดับสูงของพวกมันถูกสังเกตในลูปของ Henle ท่อตรงและท่อรวบรวม การเปลี่ยนแปลงในการทำงานของเอนไซม์แต่ละตัวในโรคไตต่างๆ ขึ้นอยู่กับลักษณะ ความรุนแรง และการแปลเป็นภาษาท้องถิ่นของกระบวนการ พวกมันถูกสังเกตก่อนการปรากฏตัวของการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาในไต เนื่องจากเนื้อหาของเอ็นไซม์ต่างๆ ถูกแปลเป็นภาษาท้องถิ่นอย่างชัดเจนใน nephron การกำหนดเอนไซม์หนึ่งหรืออย่างอื่นในปัสสาวะสามารถนำไปสู่การวินิจฉัยเฉพาะที่ของกระบวนการทางพยาธิวิทยาในไต (glomeruli, tubules, cortical หรือ medullary layer) การวินิจฉัยแยกโรค ของโรคไตและการกำหนดพลวัต (การลดทอนและการกำเริบ) ของกระบวนการในเนื้อเยื่อของไต

สำหรับการวินิจฉัยแยกโรคของระบบทางเดินปัสสาวะ จะใช้การกำหนดกิจกรรมในเลือดและปัสสาวะของเอนไซม์ต่อไปนี้: lactate dehydrogenase (LDH), leucine aminopeptidase (LAP), acid phosphatase (AP), alkaline phosphatase (ALP) ), β-glucuronidase, glutamine oxaloacetic transaminase , aldolase, transamidinase ฯลฯ กิจกรรมของเอนไซม์ในเลือดและปัสสาวะถูกกำหนดโดยใช้วิธีทางชีวเคมี spectrophotometric chromatographic fluorimetric และ chemiluminescent

เอนไซม์ในโรคไตมีความเด่นชัดและเป็นธรรมชาติมากกว่าเอนไซม์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในระยะเฉียบพลันของโรค (pyelonephritis เฉียบพลัน, การบาดเจ็บ, การสลายตัวของเนื้องอก, ภาวะไตวาย ฯลฯ ) ในโรคเหล่านี้พบกิจกรรมสูงของ transamidinase, LDH, ALP และ CF, hyaluronidase, LAP รวมถึงเอนไซม์ที่ไม่เฉพาะเจาะจงเช่น GSHT, catalase [Polyantseva LR, 1972]

การคัดเลือกเอ็นไซม์ในเนฟรอนแบบเฉพาะเจาะจงเมื่อตรวจพบ LAP และอัลคาไลน์ฟอสฟาเตสในปัสสาวะทำให้สามารถพูดได้อย่างมั่นใจเกี่ยวกับโรคไตเฉียบพลันและเรื้อรัง (ภาวะไตวายเฉียบพลัน, เนื้อร้ายท่อไต, ไตวายเรื้อรัง) [Shemetov VD, 1968] ตามที่ A.A. Karelin และ L.R. Polyantseva (1965) ได้กล่าวไว้ว่า transamidinase มีอยู่ในสองอวัยวะเท่านั้น - ไตและตับอ่อน เป็นเอ็นไซม์ไมโตคอนเดรียของไตและมักไม่มีในเลือดและปัสสาวะ สำหรับโรคไตต่างๆ transamidinase จะปรากฏในเลือดและปัสสาวะและในกรณีที่ตับอ่อนเสียหาย - เฉพาะในเลือด

Krotkiewski (1963) ถือว่ากิจกรรมของอัลคาไลน์ฟอสฟาเตสในปัสสาวะเป็นการทดสอบความแตกต่างในการวินิจฉัยโรคไตวายเรื้อรังและไตอักเสบ ซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะของ pyelonephritis และ glomerulosclerosis ของเบาหวานมากกว่าโรคไตอักเสบเฉียบพลันและเรื้อรัง การเปลี่ยนแปลงที่เพิ่มขึ้นของอะไมลาซีเมียพร้อมกับการลดลงของอะไมลาซูเรียพร้อมกันอาจบ่งบอกถึงโรคไตและการย่นของไต LAP มีความสำคัญมากที่สุดสำหรับการเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยาในโกลเมอรูไลและท่อไตที่ซับซ้อนเนื่องจากเนื้อหาในส่วนต่าง ๆ ของไตจะสูงกว่า [ Shepotinovsky VP และคณะ, 1980]. สำหรับการวินิจฉัยโรคไตอักเสบลูปัส แนะนำให้ตรวจหา β-glucuronidase และ CF [Privalenko M.N. et al., 1974.

เมื่อประเมินบทบาทของเอนไซม์ในการวินิจฉัยโรคไต ควรพิจารณาประเด็นต่อไปนี้ เอ็นไซม์ซึ่งเป็นโปรตีนในธรรมชาติที่มีน้ำหนักโมเลกุลน้อยสามารถผ่านโกลเมอรูไลที่ไม่บุบสลาย กำหนดสิ่งที่เรียกว่าเอ็นไซมูเรียทางสรีรวิทยา ในบรรดาเอนไซม์เหล่านี้ α-amylase (น้ำหนักโมเลกุลสัมพัทธ์ 45,000) และ uropepsin (น้ำหนักโมเลกุลสัมพัทธ์ 38,000) จะถูกตรวจพบในปัสสาวะอย่างต่อเนื่อง

นอกจากเอ็นไซม์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำในปัสสาวะของบุคคลที่มีสุขภาพดีแล้ว เอ็นไซม์อื่นๆ ยังสามารถพบได้ในระดับความเข้มข้นเล็กน้อย: LDH, แอสปาเทตและอะลานีนอะมิโนทรานสเฟอเรส, อัลคาไลน์ฟอสฟาเตสและซีพี, มอลเทส, อัลโดเลส, ไลเปส, โปรตีเอสและเปปติเดสต่างๆ, ซัลฟาเทส, คาตาเลส, ไรโบนิวคลีเอส, เปอร์ออกซิเดส

เอนไซม์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูงที่มีน้ำหนักโมเลกุลสัมพัทธ์มากกว่า 70,000-100,000 ตาม Richterich (1958) และ Hess (1962) สามารถเจาะเข้าไปในปัสสาวะได้ก็ต่อเมื่อการซึมผ่านของตัวกรองไตบกพร่อง เนื้อหาปกติของเอนไซม์ในปัสสาวะไม่อนุญาตให้แยกกระบวนการทางพยาธิวิทยาในไตด้วยการอุดตันของท่อไต ด้วย epsimuria เอ็นไซม์สามารถปล่อยออกมาได้ไม่เพียงแค่จากไตเท่านั้น แต่ยังมาจากอวัยวะอื่น ๆ ของเนื้อเยื่อเซลล์ของเยื่อเมือกของทางเดินปัสสาวะต่อมลูกหมากรวมถึงปัสสาวะที่มีเลือดออกหรือเม็ดเลือดขาว

เอ็นไซม์ส่วนใหญ่ไม่จำเพาะต่อไต ดังนั้นจึงยากที่จะระบุได้ว่าเอ็นไซม์ที่พบในปัสสาวะของคนที่มีสุขภาพดีและป่วยมาจากไหน อย่างไรก็ตาม ระดับของเอ็นไซมูเรียสำหรับเอ็นไซม์ที่ไม่จำเพาะต่อความเสียหายของไตนั้นสูงกว่าปกติหรือที่พบในโรคของอวัยวะอื่นๆ สามารถให้ข้อมูลที่มีค่ามากขึ้นได้จากการศึกษาที่ครอบคลุมเกี่ยวกับพลวัตของเอนไซม์จำนวนหนึ่ง โดยเฉพาะอย่างยิ่งเอนไซม์เฉพาะอวัยวะ เช่น ทรานสอะมิเนส

ในการตัดสินคำถามเกี่ยวกับที่มาของไตของเอนไซม์ในปัสสาวะ การศึกษาไอโซไซม์ที่มีการระบุเศษส่วนตามแบบฉบับของอวัยวะที่ศึกษาจะช่วยได้ ไอโซไซม์เป็นเอ็นไซม์ที่มีปฏิกิริยาไอโซเจนิก (กระตุ้นปฏิกิริยาเดียวกัน) แต่ต่างกันในโครงสร้างทางเคมีและคุณสมบัติอื่นๆ เนื้อเยื่อแต่ละส่วนมีลักษณะสเปกตรัมของไอโซไซม์ วิธีการที่มีค่าสำหรับการแยกไอโซไซม์คืออิเล็กโตรโฟรีซิสในแป้งและเจลพอลิอะคริลาไมด์ เช่นเดียวกับโครมาโตกราฟีการแลกเปลี่ยนไอออน

โปรตีน Bens Jones

ด้วย multiple myeloma และ macroglobulinemia ของ Waldenstrom โปรตีน Bens-Jones จะพบในปัสสาวะ วิธีการตรวจหาโปรตีนที่ระบุชื่อในปัสสาวะนั้นขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาการตกตะกอนด้วยอุณหภูมิ วิธีการก่อนหน้านี้ซึ่งประเมินการละลายของโปรตีนนี้ที่อุณหภูมิ 100 ° C และการตกตะกอนซ้ำด้วยการทำให้เย็นลงในภายหลังนั้นไม่น่าเชื่อถือ เนื่องจากโปรตีน Bens-Jones ไม่ใช่ทั้งหมดมีคุณสมบัติที่สอดคล้องกัน

การระบุพาราโปรตีนนี้เชื่อถือได้มากกว่าโดยการตกตะกอนที่อุณหภูมิ 40-60 องศาเซลเซียส อย่างไรก็ตาม แม้ภายใต้สภาวะเหล่านี้ ฝนอาจไม่เกิดขึ้นในสภาพที่เป็นกรดมากเกินไป (pH< 3,0—3,5) или слишком щелочной (рН >6.5) ปัสสาวะที่มีค่า OPM ต่ำและโปรตีน Bens-Jones ที่มีความเข้มข้นต่ำ เงื่อนไขที่ดีที่สุดสำหรับการตกตะกอนนั้นมาจากวิธีการที่เสนอโดย Patnem: ปัสสาวะที่กรองแล้ว 4 มล. ผสมกับบัฟเฟอร์อะซิเตท 2 M 1 มล. pH 4.9 และอุ่นเป็นเวลา 15 นาทีในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 56 ° C เมื่อมีโปรตีน Bens-Jones จะเกิดการตกตะกอนเด่นชัดภายใน 2 นาทีแรก

หากความเข้มข้นของโปรตีน Bens-Jones น้อยกว่า 3 g / L ตัวอย่างอาจเป็นลบ แต่ในทางปฏิบัติสิ่งนี้หายากมากเนื่องจากความเข้มข้นในปัสสาวะมักจะมีความสำคัญมากกว่า ไม่สามารถพึ่งพาตัวอย่างต้มได้ ด้วยความมั่นใจอย่างสมบูรณ์ มันสามารถตรวจพบในปัสสาวะโดยวิธีอิมมูโนอิเล็กโทรโฟเรติกโดยใช้ซีรั่มจำเพาะกับสายอิมมูโนโกลบูลินที่หนักและเบา

โปรตีนในปัสสาวะ: วิธีการกำหนด

โปรตีนในปัสสาวะทางพยาธิวิทยา เป็นหนึ่งในสัญญาณที่สำคัญและต่อเนื่องที่สุดของโรคไตและทางเดินปัสสาวะ การกำหนดความเข้มข้นของโปรตีนในปัสสาวะเป็นองค์ประกอบที่สำคัญและจำเป็นในการวิเคราะห์ปัสสาวะ การระบุและการประเมินเชิงปริมาณของโปรตีนในปัสสาวะมีความสำคัญไม่เพียงแต่ในการวินิจฉัยโรคไตปฐมภูมิและทุติยภูมิจำนวนมากเท่านั้น การประเมินการเปลี่ยนแปลงความรุนแรงของโปรตีนในปัสสาวะในไดนามิกจะนำข้อมูลเกี่ยวกับกระบวนการทางพยาธิวิทยาเกี่ยวกับประสิทธิผลของการรักษา การตรวจหาโปรตีนในปัสสาวะ แม้ในปริมาณเพียงเล็กน้อย ควรเตือนถึงโรคไตหรือทางเดินปัสสาวะที่อาจเกิดขึ้นได้ และควรตรวจซ้ำ ควรสังเกตเป็นพิเศษว่าการศึกษาปัสสาวะไม่สมเหตุสมผล และโดยเฉพาะอย่างยิ่ง การตรวจหาโปรตีนในปัสสาวะโดยไม่สังเกตทั้งหมด กฎสำหรับการรวบรวม.

วิธีการทั้งหมดในการหาโปรตีนในปัสสาวะสามารถแบ่งออกเป็น:

คุณภาพ,

กึ่งเชิงปริมาณ

เชิงปริมาณ

วิธีการเชิงคุณภาพ

ทุกอย่าง การทดสอบโปรตีนในปัสสาวะคุณภาพสูง ขึ้นอยู่กับความสามารถของโปรตีนในการทำให้เสียสภาพภายใต้อิทธิพลของปัจจัยทางกายภาพและทางเคมีต่างๆ เมื่อมีโปรตีนในตัวอย่างปัสสาวะทดสอบ อาจมีตะกอนขุ่นหรือตะกอนตกตะกอนปรากฏขึ้น

ปัสสาวะต้องเป็นกรด ปัสสาวะของปฏิกิริยาอัลคาไลน์ถูกทำให้เป็นกรดด้วยกรดอะซิติกหลายหยด (2 - 3) หยด (5 - 10%)

ปัสสาวะควรมีความใส หมอกควันจะถูกลบออกผ่านตัวกรองกระดาษ หากความขุ่นไม่หายไป ให้เติมแป้งโรยตัวหรือแมกนีเซียที่ไหม้ (ประมาณ 1 ช้อนชาต่อปัสสาวะ 100 มล.) เขย่าและกรอง

ควรทำการทดสอบคุณภาพในหลอดทดลองสองหลอด ซึ่งหนึ่งในนั้นคือหลอดควบคุม

ควรมองหาหมอกควันบนพื้นหลังสีดำในแสงที่ส่องผ่าน

วิธีการเชิงคุณภาพในการหาโปรตีนในปัสสาวะ ได้แก่

การทดสอบแหวนเกลเลอร์,

ทดสอบด้วยกรดซัลโฟซาลิไซลิก 15 - 20%,

การทดสอบการเดือดและอื่น ๆ

วิธีกึ่งเชิงปริมาณ

ถึง วิธีกึ่งเชิงปริมาณ เกี่ยวข้อง:

วิธี Brandberg-Roberts-Stolnikov,

การตรวจหาโปรตีนในปัสสาวะโดยใช้แผ่นตรวจวินิจฉัย

เกล็ดของเมือกที่มีไกลโคโปรตีนในปริมาณสูง (เช่น ในกระบวนการอักเสบในทางเดินปัสสาวะ pyuria แบคทีเรีย) สามารถเกาะติดกับโซนตัวบ่งชี้ของแถบและนำไปสู่ผลลัพธ์ที่เป็นเท็จ ผลบวกที่ผิดพลาดสามารถเชื่อมโยงกับความเข้มข้นสูงได้เช่นกัน ยูเรีย... ปัญหาแสงและการมองเห็นสีไม่ดีอาจทำให้เกิดผลลัพธ์ที่ไม่ถูกต้อง

วิธีการเชิงปริมาณ

ถูกต้อง การหาปริมาณโปรตีนในปัสสาวะ ในบางกรณีก็กลายเป็นงานที่น่ากลัว ความยากลำบากในการแก้ปัญหานั้นพิจารณาจากปัจจัยหลายประการดังต่อไปนี้:

การปรากฏตัวของสารประกอบหลายชนิดในปัสสาวะที่อาจรบกวนปฏิกิริยาเคมี

ความผันผวนอย่างมีนัยสำคัญในเนื้อหาและองค์ประกอบของโปรตีนในปัสสาวะในโรคต่าง ๆ ซึ่งทำให้การเลือกวัสดุสอบเทียบที่เพียงพอมีความซับซ้อน

มีความสัมพันธ์เชิงเส้นตรงระหว่างการดูดซึมของสารเชิงซ้อนที่เกิดขึ้นระหว่างปฏิกิริยาเคมีกับปริมาณโปรตีนในตัวอย่างในระดับความเข้มข้นที่หลากหลาย ซึ่งจะหลีกเลี่ยงการดำเนินการเพิ่มเติมเมื่อเตรียมตัวอย่างสำหรับการวิจัย

ควรจะเรียบง่าย ไม่ต้องการคุณสมบัติของนักแสดงสูง ดำเนินการจำนวนน้อย;

มีความไวสูง ความน่าเชื่อถือในการวิเคราะห์เมื่อใช้วัสดุที่ตรวจสอบในปริมาณน้อย

ทนต่อปัจจัยต่าง ๆ (ความผันผวนในองค์ประกอบของตัวอย่าง การปรากฏตัวของยา ฯลฯ );

มีค่าใช้จ่ายที่ยอมรับได้

สามารถปรับให้เข้ากับเครื่องวิเคราะห์อัตโนมัติได้อย่างง่ายดาย

ผลการตรวจไม่ควรขึ้นอยู่กับองค์ประกอบโปรตีนของตัวอย่างปัสสาวะที่วิเคราะห์

วิธีการวัดความขุ่น

วิธีการวัดความขุ่นรวมถึง:

การหาโปรตีนด้วยกรดซัลโฟซาลิไซลิก (SSA)

การหาโปรตีนด้วยกรดไตรคลอโรอะซิติก (TCA)

การหาปริมาณโปรตีนด้วยเบนโซเนียมคลอไรด์

วิธีการสี

ซึ่งรวมถึง:

ปฏิกิริยาไบยูเรต,

วิธีโลว์รี่

วิธีการขึ้นอยู่กับความสามารถของสีย้อมต่างๆในการสร้างสารเชิงซ้อนที่มีโปรตีน:

พอนโซ เอส (ปอนโซ เอส),

คูแมสซี่ บริลเลียนท์ บลู

ไพโรกัลลอลสีแดง

จากข้อมูลเชิงประจักษ์ ขอแนะนำให้กำหนดโปรตีนด้วยวิธีต่างๆ สองวิธี และคำนวณค่าที่แท้จริงโดยใช้สูตรใดสูตรหนึ่งต่อไปนี้: โปรตีนในปัสสาวะ = 0.4799 B + 0.5230 L; โปรตีนในปัสสาวะ = 1.5484 B - 0.4825 S; โปรตีนในปัสสาวะ = 0.2167 S + 0.7579 L; โปรตีนในปัสสาวะ = 1.0748 P - 0.0986 B; โปรตีนในปัสสาวะ = 1.0104 P - 0.0289 S; โปรตีนในปัสสาวะ = 0.8959 P + 0.0845 L; โดยที่ B คือผลลัพธ์ของการวัดด้วย Coomassie G-250; L - ผลการวัดด้วยรีเอเจนต์ของ Lowry; P คือผลการวัดด้วย pyrogallol molybdate; S - ผลการวัดด้วยกรดซัลโฟซาลิไซลิก

วรรณกรรม:

OV Novoselova, MB Pyatigorskaya, Yu. E. Mikhailov, "ลักษณะทางคลินิกของการตรวจหาและประเมินโปรตีนในปัสสาวะ", คู่มือของหัวหน้า CDL, ฉบับที่ 1, มกราคม 2550

A. V. Kozlov, "Proteinuria: วิธีการตรวจหา", การบรรยาย, เซนต์ปีเตอร์สเบิร์ก, SPbMAPO, 2000

VL Emanuel "การวินิจฉัยโรคไตในห้องปฏิบัติการ โรคทางเดินปัสสาวะ ", - คู่มือหัวหน้า CDL ฉบับที่ 12 ธันวาคม 2549

ในและ. พัพโคว่า, แอล.เอ็ม. Prasolova - วิธีการกำหนดโปรตีนในปัสสาวะ (ทบทวนข้อมูลวรรณกรรม)

คู่มือวิธีการวิจัยทางห้องปฏิบัติการทางคลินิก. เอ็ด. อี.เอ.คอสท์. มอสโก "ยา", 197

โปรตีนในปัสสาวะ (proteinuria) - การปรากฏตัวของโปรตีนในปัสสาวะในระดับความเข้มข้นที่ทำให้สามารถระบุได้ด้วยวิธีการเชิงคุณภาพ

แยกแยะ

โปรตีนในไตและ
โปรตีนในปัสสาวะนอกไต (หลังไต)

โปรตีนในไต

โปรตีนในไตเกิดจากความเสียหายต่อตัวกรองไตหรือความผิดปกติของเยื่อบุผิวท่อที่ซับซ้อน

จัดสรรโปรตีนในปัสสาวะที่คัดเลือกและไม่เฉพาะเจาะจงขึ้นอยู่กับอัตราส่วนของโปรตีนในพลาสมาและโปรตีนในปัสสาวะ น้ำหนักโมเลกุลและประจุ

โปรตีนที่เลือกได้

โปรตีนที่เลือกได้เกิดขึ้นโดยมีการละเมิดตัวกรองไตน้อยที่สุด (มักจะย้อนกลับได้) ซึ่งแสดงโดยโปรตีนน้ำหนักโมเลกุลต่ำ (น้ำหนักโมเลกุลไม่เกิน 68,000) - อัลบูมิน, เซรูโลพลาสมิน, ทรานเฟอร์ริน

โปรตีนที่ไม่ผ่านการคัดเลือก

โปรตีนที่ไม่ผ่านการคัดเลือกจะพบได้บ่อยมากขึ้นเมื่อตัวกรองได้รับความเสียหายอย่างรุนแรงมากขึ้น เมื่อโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลขนาดใหญ่เริ่มสูญเสียไป การคัดเลือกโปรตีนในปัสสาวะเป็นคุณลักษณะการวินิจฉัยและการพยากรณ์โรคที่สำคัญ

โปรตีนในไตสามารถ:

อินทรีย์และ
การทำงาน (สรีรวิทยา)

โปรตีนในไตอินทรีย์

โปรตีนในไตอินทรีย์เกิดขึ้นกับความเสียหายอินทรีย์ต่อไต ขึ้นอยู่กับกลไกการเกิดขึ้นที่โดดเด่น โปรตีนอินทรีย์บางชนิดสามารถแยกแยะได้

โปรตีนในไต

โปรตีนในไต - เกิดจากความเสียหายต่อตัวกรองไต, เกิดขึ้นกับ glomerulonephritis และโรคไตที่เกี่ยวข้องกับโรคเมตาบอลิซึมหรือหลอดเลือด (glomerulonephritis, ความดันโลหิตสูง, การกระทำของปัจจัยติดเชื้อและภูมิแพ้, decompensation ของกิจกรรมการเต้นของหัวใจ)

โปรตีนในท่อปัสสาวะ

โปรตีนในท่อปัสสาวะ - เกี่ยวข้องกับการที่ท่อไม่สามารถดูดกลับโปรตีนน้ำหนักโมเลกุลต่ำในพลาสมาที่ผ่านตัวกรองไตที่ไม่เปลี่ยนแปลง (โรคอะไมลอยด์, เนื้อร้ายท่อเฉียบพลัน, โรคไตอักเสบคั่นระหว่างหน้า, กลุ่มอาการแฟนโคนี)

โปรตีนในปัสสาวะก่อนไต

โปรตีนในปัสสาวะก่อนไต (มากเกินไป) - พัฒนาเมื่อมีความเข้มข้นในพลาสมาสูงผิดปกติของโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำซึ่งถูกกรองโดยโกลเมอรูไลปกติในปริมาณที่เกินความสามารถทางสรีรวิทยาของทูบูลในการดูดซับกลับ (หลาย myeloma, เนื้อร้ายของกล้ามเนื้อ, เม็ดเลือดแดงแตก)

โปรตีนในไตทำงาน

โปรตีนในไตทำงานไม่สัมพันธ์กับโรคไตและไม่ต้องการการรักษา

โปรตีนในปัสสาวะทำงานรวมถึง:

เดินขบวน
ทางอารมณ์,
เย็น,
ทำให้มึนเมา,
orthostatic (เฉพาะในเด็กและในท่ายืนเท่านั้น)

โปรตีนในปัสสาวะนอกไต (หลังไต)

ด้วยโปรตีนในปัสสาวะนอกไต (หลังไต) โปรตีนสามารถเข้าสู่ปัสสาวะจากทางเดินปัสสาวะและอวัยวะเพศ ในกรณีนี้ไม่มีอะไรมากไปกว่าส่วนผสมของสารหลั่งการอักเสบ

โปรตีนในปัสสาวะจากภายนอกมักไม่เกิน 1 กรัมต่อวันซึ่งมักเกิดขึ้นชั่วคราว

การวินิจฉัยภาวะโปรตีนในปัสสาวะนอกไตได้รับความช่วยเหลือจากการทดสอบด้วยแก้วสามแก้วและการตรวจระบบทางเดินปัสสาวะ

โปรตีนในปัสสาวะหลังเกิดกับกระเพาะปัสสาวะอักเสบ, ท่อปัสสาวะอักเสบ

วิธีการกำหนดโปรตีนในปัสสาวะ

ความชัดเจนของปัสสาวะเป็นข้อกำหนดเบื้องต้นสำหรับการทดสอบโปรตีน

ตัวอย่างเชิงคุณภาพ

การทดสอบกรดซัลโฟซาลิไซลิก

เทปัสสาวะที่กรองแล้ว 3-4 มล. ลงในหลอดทดลองสองหลอด เติมสารละลายกรดซัลโฟซาลิไซลิก 20% ลงในหลอดทดลอง 6–8 หยด หลอดที่สองคือตัวควบคุม เทียบกับพื้นหลังสีเข้ม ให้เปรียบเทียบหลอดควบคุมกับหลอดทดลอง หากมีโปรตีน กลุ่มตัวอย่างปัสสาวะจะพบกลุ่มเมฆสีเหลือบ

ผลลัพธ์ถูกระบุดังนี้:

ปฏิกิริยาเป็นบวกเล็กน้อย (+)
บวก (++),
เป็นบวกอย่างยิ่ง (+++)

ตัวอย่างมีความไวสูง

คุณยังสามารถใช้ตัวอย่างแบบแห้งได้ เมื่อเติมกรดซัลโฟซาลิไซลิกหลายผลึกหรือกระดาษกรองล่วงหน้าด้วยสารละลายของกรดนี้ลงในปัสสาวะหลายมิลลิลิตร

ผลบวกเท็จอาจเกิดจากการได้รับสารไอโอดีน ยาซัลฟา เพนนิซิลลินปริมาณมาก และกรดยูริกในปัสสาวะมีความเข้มข้นสูง

การทดสอบกรดไนตริก (การทดสอบเกลเลอร์)

1-2 มล. ของสารละลายกรดไนตริก 50% เทลงในหลอดทดลอง จากนั้นปัสสาวะในปริมาณที่เท่ากันบนกรด เมื่อมีโปรตีน จะมีวงแหวนสีขาวปรากฏขึ้นที่ขอบของของเหลวสองชนิด บางครั้งวงแหวนสีม่วงแดงจะก่อตัวขึ้นเหนือขอบเขตระหว่างของเหลวเล็กน้อยจากการปรากฏตัวของยูเรต วงแหวนยูเรตซึ่งแตกต่างจากวงแหวนโปรตีนจะละลายเมื่อให้ความร้อนอย่างอ่อนโยน

การทดสอบที่สดใส

การทดสอบการเดือดที่สดใสและการตรวจคัดกรองโปรตีนในปัสสาวะ (ตัวอย่างสีแบบแห้ง) ต้องใช้รีเอเจนต์เพียงเล็กน้อยหรือไม่มีเลย

เมื่อต้มปัสสาวะที่มีโปรตีน จะทำให้เสียสภาพ กลายเป็นตะกอนขุ่นหรือเป็นสะเก็ดที่ไม่ละลายในกรดอะซิติก 6% ซึ่งแตกต่างจากเกลือฟอสเฟต การทดสอบคัดกรองขึ้นอยู่กับความสามารถของโปรตีน (อัลบูมิน) ในการเปลี่ยนสีของกระดาษที่เคลือบด้วยตัวบ่งชี้ (โดยปกติคือสีน้ำเงินโบรโมฟีนอล) และบัฟเฟอร์ ความสัมพันธ์โดยตรงระหว่างความเข้มของสีของกระดาษบ่งชี้ (Albufan, Albutest - สาธารณรัฐเช็ก; Labstix, Multistix - USA; Comburtest - เยอรมนี) และปริมาณโปรตีนทำให้สามารถประมาณปริมาณโปรตีนในปัสสาวะได้คร่าวๆ อย่างไรก็ตาม การตรวจคัดกรองที่ใช้อยู่ในปัจจุบันไม่มีข้อเสีย โดยเฉพาะอย่างยิ่ง bromophenol blue ตรวจไม่พบโปรตีน Bens-Jones

วิธีการเชิงปริมาณ

Brandberg - Roberts - วิธี Stolnikov

วิธีการนี้ใช้ตัวอย่างเชิงคุณภาพด้วยกรดไนตริก ขั้นตอนตัวอย่างได้อธิบายไว้ข้างต้น การปรากฏตัวของวงแหวนบาง ๆ ที่เส้นขอบของของเหลวสองชนิดระหว่างนาทีที่ 2 และ 3 หลังจากการแบ่งชั้นแสดงว่ามีโปรตีน 0.033 g / l ในปัสสาวะ (ความเข้มข้นของโปรตีนในปัสสาวะมักจะแสดงเป็น ppm เช่นในกรัมต่อ ลิตร). หากแหวนปรากฏขึ้นเร็วกว่า 2 นาทีต่อมา ปัสสาวะควรเจือจางด้วยน้ำ เลือกการเจือจางของปัสสาวะเพื่อที่ว่าเมื่อชั้นกรดไนตริกเป็นชั้น ๆ แหวนจะปรากฏขึ้นในนาทีที่ 2-3 ระดับการเจือจางขึ้นอยู่กับความกว้างและความแน่นของแหวนและเวลาที่มีลักษณะ

ความเข้มข้นของโปรตีนคำนวณโดยการคูณ 0.033 g / l ด้วยอัตราการเจือจางของปัสสาวะ (ตารางที่ 8)

วิธีการเจือจางของ Roberts - Stolnikov มีข้อเสียหลายประการ: เป็นเรื่องส่วนตัว ลำบาก ความแม่นยำในการพิจารณาความเข้มข้นของโปรตีนลดลงเมื่อปัสสาวะเจือจาง

วิธีที่สะดวกและแม่นยำที่สุดคือวิธี nephelometric และ biuret

วิธีเนฟีโลเมตริก

มันขึ้นอยู่กับคุณสมบัติของโปรตีนที่จะให้ความขุ่นกับกรดซัลโฟซาลิไซลิกซึ่งความเข้มข้นเป็นสัดส่วนกับความเข้มข้นของโปรตีน ปัสสาวะที่กรองแล้ว 1.25 มล. เทลงในหลอดทดลองที่สำเร็จการศึกษาและเติมสารละลายกรดซัลโฟซาลิไซลิก 3% ลงในปริมาตร 5 มล. ผสมให้เข้ากัน หลังจากผ่านไป 5 นาที การสูญพันธุ์จะถูกวัดบน FEC-M (หรือโฟโตมิเตอร์อื่นๆ) ที่ความยาวคลื่น 590-650 นาโนเมตร (ตัวกรองสีส้มหรือสีแดง) เทียบกับตัวควบคุมในคิวเวตต์ที่มีความหนาของชั้น 0.5 ซม. สำหรับการควบคุม ให้ใช้ ปัสสาวะที่กรองแล้ว 1.25 มล. (เหมือนกัน) ซึ่งเติมสารละลายโซเดียมคลอไรด์ไอโซโทนิกลงในปริมาตร 5 มล.

เส้นโค้งการสอบเทียบถูกสร้างขึ้นเบื้องต้นสำหรับการขึ้นอยู่กับค่าการสูญพันธุ์ของความเข้มข้นของโปรตีน สารละลายอัลบูมินมาตรฐาน (จากซีรั่มของมนุษย์หรือวัว) ใช้เพื่อเตรียมความเข้มข้นของโปรตีนที่แตกต่างกัน กรอกใบงาน

วิธีไบยูเรต

ขึ้นอยู่กับความสามารถของโปรตีนในการให้ไวโอเล็ตบิวเรตคอมเพล็กซ์ด้วยคอปเปอร์ซัลเฟตและด่างโซดาไฟ ความเข้มของสีที่เป็นสัดส่วนโดยตรงกับปริมาณของโปรตีน ในปัสสาวะ 2 มล. เติมสารละลายกรดไตรคลอโรอะซิติก 2 มล. เพื่อตกตะกอนโปรตีนและปั่นแยก ส่วนลอยเหนือตะกอนจะถูกเทออก ในการตกตะกอน (โปรตีน) ให้เติมสารละลาย NaOH 3% 4 มล. และสารละลายคอปเปอร์ซัลเฟต 20% 0.1 มล. คนให้เข้ากันและปั่นแยก ส่วนเหนือตะกอนสีม่วงเป็นโฟโตเมตริกที่ความยาวคลื่น 540 นาโนเมตร (ตัวกรองสีเขียว) เทียบกับน้ำกลั่นในคิวเวตต์ที่มีความหนาของชั้น 1.0 ซม. ความเข้มข้นของโปรตีนจะถูกกำหนดตามตารางที่ได้จากการทดลอง กระบวนการ).

การทดสอบ Orthostatic

มันถูกระบุสำหรับโปรตีนในปัสสาวะที่สงสัยว่ามีพยาธิสภาพและโรคไตอักเสบ หลังจากถ่ายจากกระเพาะปัสสาวะเสร็จเรียบร้อยแล้ว ผู้รับการทดสอบจะอยู่ในตำแหน่งแนวนอนเป็นเวลา 2 ชั่วโมง จากนั้นโดยไม่ลุกขึ้น เขาส่งปัสสาวะส่วนหนึ่ง (ส่วนควบคุม) ในช่วง 2 ชั่วโมงข้างหน้า วัตถุจะเดินอย่างต่อเนื่องโดยรักษาตำแหน่งลอร์ดโอซิสที่เอวสูงสุด (จับไม้เท้าไว้ที่หลังส่วนล่าง) หลังจากนั้นเขาก็ให้ปัสสาวะส่วนที่สอง ในปัสสาวะทั้งสองส่วน ความเข้มข้นของโปรตีนและปริมาณโปรตีนเป็นกรัมจะถูกกำหนด และด้วยโรคไต จำนวนของเม็ดเลือดแดงใน 1 มล. ส่วนที่สองมีโปรตีนในปัสสาวะหรือปริมาณโปรตีนเริ่มต้นเพิ่มขึ้น 2-3 เท่าในหน่วยกรัม การปรากฏตัวของภาวะโลหิตจางซึ่งมักร่วมกับปริมาณโปรตีนในปัสสาวะในส่วนที่สองเป็นลักษณะเฉพาะของโรคไต

ความมุ่งมั่นของ Bens-Jones uroproteins

โปรตีน Bens-Jones เป็นโปรตีนพาราโปรตีนน้ำหนักโมเลกุลต่ำที่ทนความร้อนได้ (น้ำหนักโมเลกุลสัมพัทธ์ 20,000–45,000) ซึ่งพบส่วนใหญ่ใน myeloma หลายชนิดและ macroglobulinemia ของ Waldenstrom พวกมันคือสาย L ของแสงอิมมูโนโกลบูลิน เนื่องจากมีน้ำหนักโมเลกุลต่ำ สาย L จึงสามารถผ่านจากเลือดผ่านตัวกรองไตที่ไม่เสียหายไปยังปัสสาวะได้อย่างง่ายดาย และสามารถระบุได้ที่นั่นโดยใช้ปฏิกิริยาการตกตะกอนด้วยความร้อน แนะนำให้ทำการศึกษาเฉพาะกับการทดสอบเชิงบวกกับกรดซัลโฟซาลิไซลิกเท่านั้น การกำหนดจะดำเนินการดังนี้ ในปัสสาวะ 10 มล. เติมสารละลายกรดอะซิติก 10% 3-4 หยดและสารละลายโซเดียมคลอไรด์อิ่มตัว 2 มล. ให้ความร้อนเบา ๆ ในอ่างน้ำแล้วค่อยๆเพิ่มอุณหภูมิ หากมีโปรตีน Bens-Jones ในปัสสาวะ จากนั้นที่อุณหภูมิ 45-60 ° C ความขุ่นแบบกระจายจะปรากฏขึ้นหรือรูปแบบการตกตะกอนสีขาวหนาแน่น เมื่อให้ความร้อนจนเดือด ตะกอนจะละลาย และเมื่อเย็นตัวลง ก็จะปรากฏขึ้นอีกครั้ง ตัวอย่างนี้มีความไวไม่เพียงพอและต้องตรวจสอบโดยวิธีอิเล็กโตรโฟรีซิสและอิมมูโนอิเล็กโตรโฟรีซิส